[发明专利]肠道病毒71型静注人免疫球蛋白及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种生物免疫制品，特别是涉及一种肠 道病毒71型静注人免疫球蛋白及其制备方法。

背景技术

肠病毒在病毒学上的分类是属于微小病毒科(picornaviridae)中的 肠病毒群(enterovirus)，肠道病毒71简写为EV 71。EV 71为目前肠病 毒群中最晚发现的病毒，其感染性强且致病率高，尤其是神经系统方面的 并发症。EV71作为手足口病(HFMD)的主要病原体之一，感染性强、致病率 高，其神经毒性仅次于脊髓灰质炎病毒。除引发上述手足口症状外，还可以 引起疱疹性咽峡炎、无菌性脑膜炎、脑炎、脑干脑炎、脊髓灰质炎样的麻 痹性疾病、神经源性肺水肿或肺出血、心肌炎、急性呼吸道疾病等多种疾 病。其中枢神经系统症状主要表现为肌震颤、共济失调、颅神经受累乃至 心肺功能衰竭，患儿可能留下永久性神经系统后遗症甚至死亡。而另一类严 重并发症为肺水肿或出血，表现为患儿发病后数天内突然发生心动过速、呼 吸困难、紫绀和休克，出现双侧对称性非心源性肺水肿，这可能与脑干组织 特定结构被破坏、植物神经功能紊乱有关。这也是最近中国内地EV71疫情 中部分重症患儿的主要死因。

根据国家卫生部数据，2008年我国手足口病例达50万人，至2009年 4月份，发病人数达20余万例，重症800余人，死亡60余例，5岁以下儿 童占94.8％，形势严竣。目前我国手足口病疫情正处于上升阶段，今后一段 时间每周报告病例数将会呈增加趋势，预计将在5月至9月份间达到高峰。 中国疾病预防控制中心副主任杨维中说，从目前情况看，近期的上升势头 还是比较猛，每天全国增加报告10000多例，而今后一个较长的时间里， 还会更多地增加。

HFMD至今仍无有效的疫苗和特异性治疗手段，治疗轻症病例以门诊对 症治疗为主。重症病例出现神经系统症状或心血管系统症状等应接收住院， 重点救治。治疗原则主要是对症处理，可应用维生素B、C及抗病毒药物，但 特异性差，疗效也不能充分肯定。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种有效可防治肠道病毒71型感染的 疾病的静注人免疫球蛋白及其制备方法。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

一种肠道病毒71型静注人免疫球蛋白，可通过下列步骤制备：

a.中和试验法筛选出符合国家标准的献血者中，肠道病毒71型中和抗 体效价滴度大于等于1∶8的原料血浆；

b.每批次的混合原料血浆由不少于1000名供血浆者的原料血浆混合而 成，以中和试验法测混合原料血浆EV71抗体中和滴度，选择大于等于1∶32 的用于制备肠道病毒71型人免疫球蛋白；

c.混合后的血浆，在2℃下离心去除冷沉淀；

d.去除冷沉淀后的血浆用生理盐水稀释，用4.0醋酸缓冲液调节反应液 pH值至6.5，加95％乙醇至反应液中，使最终乙醇浓度为20％，使用冷媒控 制反应液温度至-4.5℃，板框压滤分离得沉淀；

e.将步骤d的沉淀用0℃0.01mol/LNaCl溶液搅拌溶解；

f.在上清液中加50％乙醇至反应液中，使最终乙醇浓度为17％，以醋 酸缓冲液调节反应液pH值至5.1，使用冷媒控制反应液温度至-4.5℃，板框 压滤分离除去沉淀，收集上清液；

g.将上清液进行超滤透析四遍后上DEAE-Sepharose-Fast Flow弱阴离 子交换层析，反应液温度为10℃，收集流出液。

h.将步骤g的流出液进行再超滤，以醋酸缓冲液调节pH值至4.0，温 度至10℃。透析8遍后浓缩。

i.将步骤h的浓缩液用2mol/L的冰醋酸调pH至3.85，加入30％麦芽 糖使最终浓度在10％，补加生理盐水使蛋白含量为5.8％。

j.将步骤i所得原液在24～25℃下孵放21天后用纳米膜过滤的双病毒 灭活处理；

k.将步骤j所得肠道病毒71型静注人免疫球蛋白无菌分装。

一种肠道病毒71型静注人免疫球蛋白，其中，其EV71病毒中和抗体效 价大于等于1∶256，免疫球蛋白纯度大于等于总蛋白的95％。

本发明所述的肠道病毒71型静注人免疫球蛋白，其中，所述免疫球蛋白 仅与抗人血清产生沉淀线，与抗马、牛、猪、羊血清不产生沉淀线。