[发明专利]用于纯化手足口病免疫球蛋白的琼脂糖亲和介质及其制备方法

权利要求书

1.一种用于纯化手足口病免疫球蛋白的琼脂糖亲和介质，其特征在 于，所述琼脂糖亲和介质具有以下结构：

其代表琼脂糖凝胶；R为-CH₂CH(OH)CH₂-、-CH₂CH(OH)CH₂O （CH₂）₂OCH₂CH(OH)CH₂-、-CH₂CH(OH)CH₂O（CH₂）₄OCH₂CH(OH)CH₂-、 或-CH₂CH(OH)CH₂O（CH₂）₂O（CH₂）₂OCH₂CH(OH)CH₂-；A为手足口 病疫苗；O为氧原子，所述琼脂糖凝胶为选自琼脂糖6FF、琼脂糖4FF、 琼脂糖CL-6B、琼脂糖CL-4B、琼脂糖6B、琼脂糖4B中的一种或多种；

所述琼脂糖亲和介质通过包括下述步骤的方法制得：

l）琼脂糖凝胶的活化：在琼脂糖凝胶中分别加入环氧活化剂、氢氧化 钠溶液及硼氢化钠，其中凝胶的质量份数以g计为1份，环氧活化剂的体 积份数以ml计为1～3份，氢氧化钠溶液的体积份数以ml计为1～3份，硼 氢化钠的质量份数以mg计为15份，在20～60℃下搅拌反应2～10小时， 清洗，得到环氧活化的琼脂糖凝胶；

2）手足口病疫苗的偶联：将步骤1）所得到的环氧活化的琼脂糖凝胶 加入反应瓶内，加入pH为碱性的手足口病疫苗溶液，其中环氧活化的琼 脂糖凝胶以g计与手足口病疫苗溶液以ml计的配比为1～1：1～10，在25～ 40℃水浴中振荡4～24小时；所述手足口病疫苗溶液的pH为8.0～14.0。

2.如权利要求1所述的用于纯化手足口病免疫球蛋白的琼脂糖亲和 介质，其特征在于，所述步骤2）还包括封闭的步骤：将偶联手足口病疫 苗的琼脂糖凝胶抽滤，去离子水洗涤，加入pH 11.0的0.5～2mol/L的乙 醇胺在25～40℃下振荡反应4～10小时；凝胶依次用去离子水、0.1M pH 4.0含0.5M NaCl的乙酸-乙酸钠缓冲液、去离子水和0.1M pH 8.0含0.5 M NaCl的硼酸-四硼酸钠缓冲液洗涤，水洗后抽干。

3.如权利要求1或2所述的用于纯化手足口病免疫球蛋白的琼脂糖 亲和介质，其特征在于，所述环氧活化剂为环氧氯丙烷、环氧溴丙烷、乙 二醇双缩水甘油醚、1,4-丁二醇-二缩水甘油醚、烯丙基缩水甘油醚或一缩 二乙二醇双缩水甘油醚。

4.权利要求1所述的琼脂糖亲和介质在制备手足口病免疫球蛋白中 的用途。

5.用权利要求1所述的琼脂糖亲和介质制备手足口病免疫球蛋白的 方法，包括以下步骤：

1）使用琼脂糖亲和介质纯化吸附含有手足口病免疫球蛋白的血浆样 品，所述吸附条件为pH 6.0～8.0的10～50mM中性缓冲液；

2）洗脱步骤1）中琼脂糖亲和介质吸附的血浆样品中的免疫球蛋白； 所述洗脱条件为pH 2.0～5.0的酸性缓冲液。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，还包括使用超滤、离子 交换层析或凝胶过滤层析进一步纯化步骤2）中所洗脱的血浆样品中的免 疫球蛋白。