[发明专利]用于纯化手足口病免疫球蛋白的琼脂糖亲和介质及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明涉及一种用于纯化手足 口病免疫球蛋白的琼脂糖亲和介质及其制备方法和用途。

背景技术

手足口病是由EV71等肠道病毒所引起，因起病之初手、脚部位多有 细小而质地较硬的疹子和溃疡性口腔炎症而得名。该病以婴幼儿发病为 主。大多数患者症状轻微，以发热和手、足、口腔等部位的皮疹或疱疹为 主要特征。少数患者可以并发无菌性脑膜炎、脑炎、急性弛缓性麻痹、呼 吸道感染和心肌炎等，个别重症患儿病情进展快，易发生死亡。人手足口 病免疫球蛋白是以低温乙醇蛋白分离法或经批准的其它分离法提取，并经 病毒灭活处理的特异性免疫球蛋白，用于防治手足口病。静脉注射人手足 口病免疫球蛋白能有效地抑制炎症的发生，对EV71引起的中枢神经系统 感染有一定的疗效，曾在1998年中国台湾和2000年澳大利亚的EV71流 行中得到广泛应用。

从人血浆中分离免疫球蛋白，经典方法是E.J.Cohn教授于1946年创 立的低温乙醇沉淀法，通过控制pH值、温度、蛋白浓度、离子强度和乙 醇浓度来逐级沉淀血浆中的不同蛋白质。目前，手足口病免疫球蛋白的分 离纯化就是采用低温乙醇沉淀法。但是，低温乙醇沉淀法的分离精度有限， 只能获得多种免疫球蛋白的混合产品，产品的效价较低，常常无法达到治 疗手足口病的要求。因此，急需发展一种特异性、高分离精度纯化手足口 病免疫球蛋白的分离方法，将低温乙醇沉淀法制备的免疫球蛋白产品进一 步纯化，提高产品的效价，从而获得高比活的合格产品。

亲和层析是利用了生命现象中生物分子之间非常特异的相互作用，进 行分离纯化的方法。而利用琼脂糖作为载体，以生物活性分子为配基，利 用配基与目标产物的生物学特异性，提纯目标产物已广泛应用于生物产品 的纯化生产中。自从1967年Axen等人发表用溴化氰活化多糖凝胶偶联肽 和蛋白质的方法，并成功制备固定化酶后，亲和层析在20世纪70年代有 了惊人的发展，目前已得到广泛应用。例如，陈嫚等人(刺桐胰蛋白酶抑 制剂亲和层析填料的制备及应用，北京理工大学学报，2005，25(2)：172) 报道了用交联琼脂糖为载体，三聚氯氰为活化剂，刺桐胰蛋白酶抑制剂为 配基，制备亲和层析介质的方法，用制备的亲和层析介质吸附重组人组织 型纤溶酶原激活剂突变体(reteplase，r-PA)，解吸附完全，不影响活性。 马学华等人(亲和层析法提取纯化人心肌肌钙蛋白I，哈尔滨医科大学学 报，2008，42(3)：258)报道了将兔骨骼肌肌钙蛋白C(sTnC)与经溴化 氰活化的Sepharose 4B凝胶偶联，制成sTnC亲和层析介质，从人心肌经 匀浆、离心后的上清液中提纯人心肌肌钙蛋白I(cTn I)，提纯的cTn I 可被cTn I单克隆抗体特异性识别。

根据抗体与抗原之间高度特异性可逆结合作用，可以建立相应的亲和 层析方法，这种亲和层析方法具有高收率、高纯度、能保持生物大分子天 然状态等优点。制备以手足口病疫苗为配基的手足口病免疫球蛋白亲和介 质，能够从低比活的血浆组分中特异性的吸附手足口病免疫球蛋白，从而 得到合格产品，有效利用血浆资源。

发明内容

本发明利用抗原抗体之间能够特异性相互作用，制备以手足口病疫苗 为配基的手足口病免疫球蛋白亲和介质，能够从低比活的血浆组分中特异 性的吸附手足口病免疫球蛋白。

因此，本发明的目的在于，提供一种用于纯化手足口病免疫球蛋白的 琼脂糖亲和介质。

本发明的另一个目的在于，提供上述琼脂糖亲和介质的制备方法及其 用途。

本发明的目的是采用以下技术方案来实现的。一方面，本发明提供一 种用于纯化手足口病免疫球蛋白的琼脂糖亲和介质，具有以下结构：