[发明专利]藜草花叶病毒检测用引物及其检测方法

权利要求书

1.一种藜草花叶病毒检测用引物对，该引物的正向引物序列 SEQ ID NO.1和反向引物序列SEQ ID NO.2的核苷酸序列如下：

SEQ ID NO.1：5′-TGTTATGGGCAGGGCTATG-3′

SEQ ID NO.2：5′-TGTAAATCGCAAGGGCAG-3′。

2.一种检测藜草花叶病毒的方法，该方法以样品总RNA为模 板，利用核苷酸序列为SEQ ID NO.2的引物进行反转录反应合成 cDNA，以合成的cDNA为模板，利用核苷酸序列为SEQ ID NO.1 的引物和核苷酸序列为SEQ ID NO.2的引物进行PCR扩增，反应结 束后根据特异性扩增DNA片段的位置判定藜草花叶病毒的存在。

3.根据权利要求2所述的方法，反转录反应的反应条件是在 20μL反应体系中加入4.75μLDEPC处理水，6μL总RNA，1μL的 10μmol/L的核苷酸序列为SEQ ID NO.2的引物SoMV-R，1μL的 10mmol/L的dNTP，混匀后于65℃保持5min，迅速转移到冰上 骤冷5min；然后向反应管中加入2μL的0.1mmol/L的DTT，4μL5× 反转录缓冲液，1μL的40U/μL的RNA酶抑制剂，0.25μL的200 U/μL的反转录酶，42℃反应50min；72℃15min灭活反转录酶后 获得反转录产物cDNA。

4.根据权利要求2或3所述的方法，其中PCR扩增的反应条 件是在50μL的反应体系中加入30.5μLDEPC处理水，2μLcDNA， 2μL的10μmol/L的核苷酸序列为SEQ ID NO.1的引物SoMV-F，2 μL的10μmol/L的核苷酸序列为SEQ ID NO.2的引物SoMV-R， 10×PCR缓冲液5μL，8μL的2.5mmol/L的dNTP，0.5μL的5U/μL 的DNA聚合酶。

5.根据权利要求4所述的方法，其中PCR扩增的条件为：94℃， 5min；94℃30s，54℃45s，72℃1min，共30个循环；72℃延 伸5min。

6.一种用于检测藜草花叶病毒的试剂盒，该试剂盒包含引物 SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2。