[发明专利]一种检测犬细小病毒的LAMP试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体的说涉及一种检测犬细小病毒的 环介导等温核酸扩增技术(LAMP)试剂盒。

背景技术

犬细小病毒(Canine Parvovirus，CPV)是美国Eugster于1978年 从患出血性肠炎的犬粪便中发现的病毒，该病毒为细小病毒科细小病 毒属，单股线状DNA病毒。犬细小病毒以导致犬发病率高，传染性 强、死亡率高等特点已成为犬科动物临床发病的重要致病病毒。犬细 小病毒病已成为我国养犬业最为严重的传染病之一，该病既影响着家 养宠物的生命健康，又危害着我国养犬业、毛皮动物养殖业及野生动 物保护业的发展。

目前，犬细小病毒的传统检测方法有血清学检测方法和病原学检 测方法。血清学检测方法主要为血凝试验、酶联免疫吸附试验和免疫 胶体金检测方法，但都因灵敏度不高、特异性不强等原因一直没有在 临床上普及应用。病原学检测方法目前常用F81、MDCK等传代细胞 系分离培养病毒，病毒分离方法虽然在理论上可以检出一个感染性的 病毒粒子，确诊犬细小病毒的感染，但也因分离病毒的操作繁琐、代 价高及确诊缓慢等因素同样没有投入临床应用。

随着分子生物学的发展，目前已有多种PCR方法用于犬细小病毒 的检测，虽在灵敏度方面有所改进，但由于需要精密仪器的配套使用， 同样也无法满足基层和现地检测的需求。上述的方法探索虽有一定的 研究意义，但终究不能真正应用于临床上细小病毒的早期快速诊断。

环介导等温核酸扩增技术(LAMP)是由Notomi于2000年开发的 一种新型的恒温核酸扩增方法，该技术利用4种不同的特异性引物识 别靶基因的6个特定区域，借助具有链置换作用Bst-DNA polymerase 的帮助从而可在等温条件下进行靶序列高效快速扩增。

近年来，国外已将该技术广泛应用于病原体检测。Hong TC等人 (2004)根据LAMP的原理设计了实时定量RT-LAMP方法，以快速检 测SARS-CoV，结果RT-LAMP的灵敏度是RT-PCR的100倍；Masaki Imai等人(2007)建立了快速诊断H5N1禽流感病毒的RT-LAMP检测 体系。

LAMP还可以检测细菌、真菌等病原微生物，其灵敏度和特异性 都有很好的体验。但目前尚未见该方法在犬细小病毒检测中的应用。

发明内容

本发明的目的是提供用于检测犬细小病毒的特异性LAMP引物 组。

本发明的目的在于提供一种具有高灵敏度、高特异性、可见化的、 操作方法简单的LAMP检测试剂盒。

本发明所述的LAMP引物组包括以下四条引物：

F3： 5’-TGCATCATTGATGGTTGC-3’

B3： 5’-TGGCACAGAATTTTCGATAG-3’

     5’-GGTATGGTTGGTTTCCATGGATA

FIP：

     AATATGCCATTTACTCCAGCAG-3’

     5’-CCATCTCATACTGGAACTAGTG

BIP：

     GCGCATCATCTGGATCTGTACC-3’

本发明的LAMP引物组还包括以下两条引物：

LF： 5’-CCCAATGTCTCAGATCTCAT-3’

LB： 5’-CACCAGCAGATATATACCAT-3’

本发明所述的用于检测犬细小病毒的LAMP检测试剂盒，包含有 以下四条LAMP引物：

F3： 5’-TGCATCATTGATGGTTGC-3’        18bp

B3： 5’-TGGCACAGAATTTTCGATAG-3’      20bp

     5’-GGTATGGTTGGTTTCCATGGATA

FIP：                                  45bp

     AATATGCCATTTACTCCAGCAG-3’

     5’-CCATCTCATACTGGAACTAGTG

BIP：                                  44bp