[发明专利]一种鼠骨髓瘤细胞NSO及其制备方法与应用有效
| 申请号： | 200910090069.7 | 申请日： | 2009-07-27 |
| 公开（公告）号： | CN101613676A | 公开（公告）日： | 2009-12-30 |
| 发明（设计）人： | 朱卫彬;唐捷;贾俊英;李娜 | 申请（专利权）人： | 中国科学院生物物理研究所 |
| 主分类号： | C12N5/06 | 分类号： | C12N5/06;C12P21/02 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 | 代理人： | 关 畅;任凤华 |
| 地址： | 100081北京市朝*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 骨髓瘤 细胞 nso 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种在无血清无脂类培养基中生长的鼠骨髓瘤细胞NSO，是按照包括如下步骤 的方法得到的：
(1)将鼠骨髓瘤细胞NSO接种于含血清的细胞培养基中进行培养；
(2)将步骤(1)得到的鼠骨髓瘤细胞NSO进行传代培养，传代培养过程中每代 所用的细胞培养基中血清浓度均在前一代培养中所用细胞培养基中血清浓度的基础 上进行稀释；
(3)当传代培养至所用的培养基中血清浓度为0.2-0.3％(体积百分含量)时， 用5-氮胞苷处理传代培养后的鼠骨髓瘤细胞NSO；
所述用5-氮胞苷处理的方法为用5uM 5-氮胞苷将细胞处理48小时；
(4)将步骤(3)处理后的鼠骨髓瘤细胞NSO接种至无血清、含有牛血清白蛋白 的细胞培养基中培养；
(5)将步骤(4)获得的细胞接种至无血清且不含牛血清白蛋白的细胞培养基中 培养；得到在无血清无脂类培养基中生长的鼠骨髓瘤细胞NSO。
2.根据权利要求1所述的细胞，其特征在于：所述步骤(2)中，所述稀释的倍 数为2倍。
3.根据权利要求1或2所述的细胞，其特征在于：所述步骤(2)中，所述传代 培养过程中所用的培养基是按照如下方法得到的：将含1-2％(体积百分含量)牛血 清白蛋白的杂交瘤无血清培养基与等体积的前一代培养所用的培养基进行混匀；
所述步骤(4)中所用的无血清、含有牛血清白蛋白的细胞培养基为无血清、含 1-2％(体积百分含量)牛血清白蛋白的杂交瘤无血清培养基；
所述步骤(5)中的无血清且不含牛血清白蛋白的细胞培养基为无血清、无牛血 清白蛋白的杂交瘤无血清培养基。
4.根据权利要求1所述的细胞，其特征在于：所述脂类为胆固醇和/或低密度脂 蛋白和/或大豆磷脂和/或亚油酸和/或油酸。
5.根据权利要求1所述的细胞，其特征在于：所述细胞为鼠骨髓瘤细胞NSO NSO-Ch1，其保藏号为CGMCC No.2127。
6.一种制备在无血清无脂类培养基中生长的鼠骨髓瘤细胞NSO的方法，包括如 下步骤：
(1)将鼠骨髓瘤细胞NSO接种于含血清的细胞培养基中进行培养；
(2)将步骤(1)得到的鼠骨髓瘤细胞NSO进行传代培养，传代培养过程中每代 所用的细胞培养基中血清浓度均在前一代培养中所用细胞培养基中血清浓度的基础 上进行稀释；
(3)当传代培养至所用的培养基中血清浓度为0.2-0.3％(体积百分含量)时， 用5-氮胞苷处理传代培养后的鼠骨髓瘤细胞NSO；
所述用5-氮胞苷处理的方法为用5uM 5-氮胞苷将细胞处理48小时；
(4)将步骤(3)处理后的鼠骨髓瘤细胞NSO接种至无血清、含有牛血清白蛋白 的细胞培养基中培养；
(5)将步骤(4)获得的细胞接种至无血清且不含牛血清白蛋白的细胞培养基中 培养；得到在无血清无脂类培养基中生长的鼠骨髓瘤细胞NSO。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，所述稀释的倍 数为2倍。
8.一种培养权利要求1中所述在无血清无脂类培养基中生长的鼠骨髓瘤细胞NSO 的方法，是将所述在无血清无脂类培养基中生长的鼠骨髓瘤细胞NS0接种于pH为 7.4-7.6、无胎牛血清、无牛血清白蛋白的杂交瘤无血清培养基中，在36.5-37.5℃条 件下培养。
9.权利要求1至5中任一所述在无血清无脂类培养基中生长的鼠骨髓瘤细胞NSO 在生产外源蛋白中的应用。
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