[发明专利]一种检测癌胚抗原mRNA表达量的方法及专用试剂盒

权利要求书

1.一种检测癌胚抗原mRNA表达量的试剂盒，包括如下PCR反应液：由PCR反 应缓冲液、DNA聚合酶、dATP、dCTP、dGTP、dTTP、dUTP、引物对、探针和尿嘧啶 DNA糖基化酶组成，其余为水；

引物对：一条引物的序列如序列表中序列1所示，另一条引物的序列如序列表 中序列2所示；

核苷酸序列如序列表中序列3所示的探针；

尿嘧啶DNA糖基化酶；

PCR反应缓冲液：由终浓度为18.0-19.0mmol/L的三(羟甲基)氨基甲烷盐酸 盐、终浓度为2.60-2.85mmol/L的氯化镁和终浓度为90.5-95.1mmol/L的氯化钾组 成，溶剂为水；其中，所述终浓度均为各物质在所述PCR反应缓冲液中的终浓度；

所述PCR反应缓冲液在所述PCR反应液中的浓度为0.9μl/μl；

所述DNA聚合酶在所述PCR反应液中的浓度为0.08-0.13U/μl；

所述dATP在所述PCR反应液中的浓度为380-410nmol/L；

所述dCTP在所述PCR反应液中的浓度为380-410nmol/L；

所述dGTP在所述PCR反应液中的浓度为380-410nmol/L；

所述dTTP在所述PCR反应液中的浓度为190-210nmol/L；

所述dUTP在所述PCR反应液中的浓度为380-410nmol/L；

每条所述引物在所述PCR反应液中的浓度为0.30-0.40μmol/L；

所述探针在所述PCR反应液中的浓度为0.18-0.23μmol/L；

所述尿嘧啶DNA糖基化酶在所述PCR反应液中的浓度为0.0150-0.0175U/ul。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中包括反转录缓 冲液；所述反转录缓冲液由如下物质组成：终浓度为8.5-9.5μmol/L的 Ol igo(dT)_12-18、终浓度为3.2-3.9U/μl的RNA酶抑制剂、终浓度为70.0-75.0mmol/L 的二硫苏糖醇、终浓度为175-190mmol/L的三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐、终浓度 为260-285mmol/L的氯化钾、终浓度为9.5-12.0mmol/L的氯化镁，其余为水；其 中，所述终浓度均为各物质在所述反转录缓冲液中的浓度。

3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中包括反转 录反应液；所述反转录反应液由所述反转录缓冲液、dATP、dCTP、dGTP、dTTP、逆 转录酶组成；其余为水；

所述反转录缓冲液在反转录反应液中的浓度为0.786μl/μl；

所述dATP在反转录反应液中的浓度为1.35-1.55mmol/L；

所述dCTP在反转录反应液中的浓度为1.35-1.55mmol/L；

所述dGTP在反转录反应液中的浓度为1.35-1.55mmol/L；

所述dTTP在反转录反应液中的浓度为1.35-1.55mmol/L；

所述逆转录酶在反转录反应液中的浓度为12.0-16.0U/ul。