[发明专利]提取纯化DNA的试剂有效
申请号: | 200910090335.6 | 申请日: | 2009-08-05 |
公开(公告)号: | CN101613696A | 公开(公告)日: | 2009-12-30 |
发明(设计)人: | 赵兴春;叶健;姜伯玮 | 申请(专利权)人: | 公安部物证鉴定中心 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10;C07H21/04 |
代理公司: | 北京纪凯知识产权代理有限公司 | 代理人: | 关 畅;任凤华 |
地址: | 100038北*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 提取 纯化 dna 试剂 | ||
1.一种提取纯化DNA的试剂,由以下物质组成:
预处理裂解液:pH为7.4-8.5,溶剂是水,溶质是如下终浓度的物质:10-100mM缓冲盐,0.5-5g/100ml的阴离子表面活性剂,1-100mM的螯合剂,50-150mM的可溶性盐和0.2-4mg/ml的蛋白酶K;
裂解结合液:pH=6.4-7.4,溶剂是水,溶质是如下终浓度的物质:20-150mM的缓冲盐,3-8M的Chaotropic盐,1-10%(体积百分比)的非离子表面活性剂,0.5-4g/100ml的兼性离子去污剂,10-100mM的螯合剂以及15-30%(体积百分含量)的醇;
洗涤液I:溶剂是水,溶质是如下终浓度的物质:4-6M的Chaotropic盐,25-50%(体积百分含量)的醇和10-100mM的螯合剂;
洗涤液II:75-80%(体积百分含量)乙醇水溶液;
洗脱液:是TE溶液,所述TE溶液的pH为8.0,溶剂是水,溶质是0-20mM的Tris-HCl,0-2mM的EDTA;
磁珠悬浮液:每ml磁珠悬浮液的成分如下:直径为50-1200nm的纳米级硅包被磁性微球50-100mg,其余为水。
2.一种提取纯化DNA的试剂,由以下物质组成:
预处理裂解液:pH为7.4-8.5,溶剂是水,溶质是如下终浓度的物质:10-100mM缓冲盐,0.5-5g/100ml的阴离子表面活性剂,1-100mM的螯合剂,50-150mM的可溶性盐和0.2-4mg/ml的蛋白酶K和0.025-0.05M的二硫苏糖醇;
裂解结合液:pH=6.4-7.4,溶剂是水,溶质是如下终浓度的物质:20-150mM的缓冲盐,3-8M的Chaotropic盐,1-10%(体积百分比)的非离子表面活性剂,0.5-4g/100ml的兼性离子去污剂,10-100mM的螯合剂以及15-30%(体积百分含量)的醇;
洗涤液I:溶剂是水,溶质是如下终浓度的物质:4-6M的Chaotropic盐,25-50%(体积百分含量)的醇和10-100mM的螯合剂;
洗涤液II:75-80%(体积百分含量)乙醇水溶液;
洗脱液:是TE溶液,所述TE溶液的pH为8.0,溶剂是水,溶质是0-20mM的Tris-HCl,0-2mM的EDTA;
磁珠悬浮液:每ml磁珠悬浮液的成分如下:直径为50-1200nm的纳米级硅包被磁性微球50-100mg,其余为水。
3.根据权利要求1或2所述的试剂,其特征在于:所述预处理裂解液中,缓冲盐的浓度为20-80mM,阴离子表面活性剂的浓度为0.5-4g/100ml,螯合剂的浓度为20-80mM,可溶性盐的浓度为50-130mM,蛋白酶K的浓度为0.2-2mg/ml;所述阴离子表面活性剂为十二烷基磺酸钠或十二烷基肌氨酸钠;所述可溶性盐溶液为NaCl水溶液。
4.根据权利要求3所述的试剂,其特征在于:所述可溶性盐的浓度为80-100mM;蛋白酶K的浓度为0.2-1mg/ml。
5.根据权利要求1或2所述的试剂,其特征在于:所述裂解结合液中,Chaotropic盐的浓度为4-6M,缓冲盐的浓度为50-120mM,螯合剂的浓度为20-80mM,非离子表面活性剂的浓度为2-8%(体积百分比),兼性离子去污剂的浓度为1-3g/100ml,醇的浓度为20-28%(体积百分含量);所述非离子表面活性剂为Triton X-100、Tween20、Tween 21、Tween.40、Tween 60、Tween 80、Tween 85、NP-40、Brij 30或Span 20;所述兼性离子去污剂是3-(3-胆胺丙基)-二甲氨基-1-丙磺酸;所述醇是乙醇、异丙醇或聚乙二醇。
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