[发明专利]血清钠离子酶法定量测定试剂盒及其制备方法和其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种测定血清中钠离子含量的试剂盒及其制备方法以及其检测方法。

背景技术

血液内钠离子含量对人体内电解质的调节起着重要的作用，一般钠离子的正常值在135-148mmol/L的范围内，而临床上常见的电解质紊乱是低血钠症。因此，血清中钠离子的测定已经成为医院里常规的分析项目之一。

目前应用的钠离子分析方法中常用的有火焰光度法、离子选择电极法和酶法。火焰光度法的原理是将待测钠原子通过火焰加热刺激而被激发，当回到基态时发出具有特征波长的光，火焰中由被激发的待测钠原子产生的特征波长的辐射能的强度与钠原子的数量直接成正比，而被激发的待测钠原子数量与样本中所要测定的钠原子的浓度直接成正比。但是，这种方法需要的仪器复杂，且设备昂贵，造成检测的成本高，并且需要使用可燃气体，因此，在临床分析中具有应用难度大的缺点。

离子选择电极法(Ion-Selective Electrodes、ISE)的原理是：电极溶液中被测离子接触电极时，在离子选择电极膜基质的含水层内发生离子迁移，而迁移离子的电荷改变存在着电势，因而使膜面间的电位发生变化，在测量电极与参比电极间产生一个电位差。理想的离子选择性电极需要溶液中所要测定的离子产生的电位差和离子的活度对数成比例，当活度对数保持恒定时，电位差与离子浓度的对数也成比例，由此可以求出溶液中离子的浓度。对于离子选择电极法，其理想的情况是所使用的电极都要具有单一离子的选择性，而使电极只对一种离子产生反应。但是，实际上所有的离子选择电极都存在干扰离子，即使经过校正也不能完全保证测定结果的准确性。并且，在使用离子选择性电极时要保证管道的畅通，如果经多次保养后的电极，经过定标后不能达到规定的标准，就不能再被使用，需要进行更换，由此可见，离子选择性电极具有一定的寿命。因此，离子选择电极法存在难于保证测定值的精度，且需要定期对电极进行检测，电极的寿命不长这样的缺点。

对于酶法的测定，其原理在于：通过钠依赖性β-半乳糖苷酶催化底物O-硝基酚-β-D-吡喃半乳糖的酶动力学反应检测钠离子，其产物O-硝基酚在405nm的吸光度变化率与钠浓度呈正比。酶法检测血清钠离子的优点在于可以使用全自动生化分析仪，不需要专门的仪器和相应的耗材，因此，大大的降低了检测的成本。

在现有技术中，对于酶法测定钠离子的方法公开有中国200410066188.6的专利申请，记载了一种酶法测定钠离子含量的方法及钠离子诊断试剂盒，使用的酶为β-半乳糖苷酶，底物为O-硝基酚基-β-D-吡喃糖苷半乳糖。样本中的钠离子激活β-半乳糖苷酶，分解底物O-硝基酚基-β-D-吡喃糖苷半乳糖，生成有色物质，该生成有色物质的速率与样本中的钠离子浓度成正比。为了使反应体系中的钠离子维持在一个合适的浓度范围，需要加入一定浓度的穴醚或冠醚来结合掉一部分钠离子，为了保证穴醚或冠醚与钠离子的结合效率较高，反应体系应为碱性。但是，β-半乳糖苷酶和O-硝基酚基-β-D-吡喃糖苷半乳糖在溶液中不稳定，尤其是在碱性溶液中更不易稳定，因此，该钠离子诊断试剂盒存在血清中钠离子的检测精度差、试剂不稳定这样的缺点。虽然该专利申请提出了可以将试剂制成稳定的干粉试剂或干试剂，但是却没有具体的提供干粉试剂或干试剂的制备方法。

专利申请200610028451.1也公开了一种酶法检测血清中钠离子的试剂及方法，检测原理与专利申请号200410066188.6基本相同，但使用了成本较低的冠醚代替穴醚。虽然该申请将试剂做成稀释液和冻干品来保证试剂的稳定性，并且使用15％或18％的蔗糖作为赋形剂。但是，蔗糖的共熔点较低，10％的蔗糖共熔点为-26℃，40％的蔗糖共熔点为-33℃。一般情况下，冻干过程中为了避免试剂融化必须将主冻干的温度控制在共熔点5℃以下，因此，对同时兼顾冷阱和箱体制冷的设备提出了较高的要求。并且在-30℃下、冰面的饱和蒸汽压为0.37mbar(大气压为1000mbar)，冻干过程中的压力只有维持在0.12mbar左右，才能达到较高的升华效率，否则冻干的速度会很慢，因此，对真空泵及真空冷冻干燥机封闭性的要求也很高。再加上蔗糖在冻结时极易形成玻璃态，且在冰面形成干物质密度较大的表层，对冻干速率和冻干外形有很大的影响。因此，专利申请200610028451.1公开的血清中钠离子的检测方法，还存在一定的缺陷。

发明内容

因此，本发明在试剂组成成分上进行了优化，提供一种血清钠离子酶法定量测定试剂盒。本发明的血清钠离子酶法定量测定试剂盒，采用不同于现有技术的赋形剂，使该冻干试剂比现有的冻干试剂更稳定，且冻干工艺对设备的要求低。