[发明专利]一种多不饱和脂肪酸甘油三酯的生产方法

权利要求书

1.一种多不饱和脂肪酸甘油三酯的生产方法，其特征在于包括以下步骤：

酶的制备，具体包括

将假丝酵母菌在YPD培养基上活化4小时，

以体积百分比10％的接种量接种至装有100mL种子培养基的500mL摇瓶中，种子培养基的成分为2g/L的酵母膏、5g/L的豆油、1g/L的K₂HPO₄、0.1g/L的MgSO₄·7H₂O、以及0.5g/L的NaCl，初始pH为5.0，培养温度25-30℃，再置于HYG-II型回转式恒温调速摇瓶柜中，转速220r/min，培养时间为20h，

把种子培养液按体积分数10％的接种量接种至装有发酵培养基的发酵罐中，发酵培养基的成分为3g/L的酵母膏、20g/L的豆油、1g/L的K₂HPO₄、0.1g/L的MgSO₄·7H₂O、以及0.5g/L的NaCl，培养温度28-30℃，搅拌转速300r/min，通气量4.0L/min，pH为6.0，发酵时间28h，获得发酵液；

发酵液的分离纯化，即将发酵液经5000rpm离心30min，室温下，用截留分子量为20000的PU-20K-PS管式超滤膜系统处理，膜面积为0.186m²，膜前压力为1.2MPa，膜后压力为0.15MPa，pH为6.0～7.0，分离获得酶浓缩液；

酶的固定化，即先将载体加入酶浓缩液中并进行孵育，再经清洗获得固化酶；

酯交换反应，即丙三醇与多不饱和脂肪酸乙酯在固化酶作用下反应，制得多不饱和脂肪酸甘油三酯；

多不饱和脂肪酸甘油三酯的提纯。

2.根据权利要求1所述的一种多不饱和脂肪酸甘油三酯的生产方法，其特征在于所述的酯交换反应是指：

在间歇式酶反应器中加入质量比1∶6-8∶0.6-0.7的丙三醇、多不饱和脂肪酸乙酯与固化酶，并加入占丙三醇、多不饱和脂肪酸乙酯与固化酶总 质量8％的油酸钾作为均相化试剂，温度为25-30℃，初始水活度为0.40-0.50，反应6-8h制得多不饱和脂肪酸甘油三酯。

3.根据权利要求1所述的一种多不饱和脂肪酸甘油三酯的生产方法，其特征在于所述的酶的固定化包括：

按照酶液活力与载体质量比为8000∶1U/g，把载体加入酶浓缩液中；

在20-30℃、摇床反应器80r/min转速下、孵育8-10h固定化；

吸去酶液，用pH8.0 0.1mol/L的磷酸缓冲液清洗，所得固化酶于4℃保存。

4.根据权利要求1所述的一种多不饱和脂肪酸甘油三酯的生产方法，其特征在于所述的载体经以下方法制得：

混合体积比为1∶0.4-0.5∶0.7-0.8∶0.7-0.8的甲基丙烯酸缩水甘油酯、二乙烯基苯、甲苯和正庚烷，以10g/L的比例将粒径小于80nm的纳米碳酸钙加入上述混合液中，并置于搅拌器中反复搅拌混合，再置于65℃恒温反应器中反应12h；

所得固体经粉碎后，筛分收集0.3-0.45mm粒径的颗粒，用乙醇抽提20-24h，然后用0.1mol/L的HCl于常温、搅拌状态下浸泡70-72h，并且每隔24h换1次HCl；

最后用去离子水冲洗至中性，制得的载体密封湿态保存。

5.根据权利要求4所述的一种多不饱和脂肪酸甘油三酯的生产方法，其特征在于所述的酶的固定化之前，还包括载体的活化步骤，即

将载体于65℃下用0.1mol/L HCl水解12h；

用去离子水冲洗至中性，以每2.0kg载体加入100L 10％的戊二醛酸性溶液的比例，在室温下于反应器中搅拌反应12h；

用去离子水洗去戊二醛，所得载体置于4℃保存。

6.根据权利要求1所述的一种多不饱和脂肪酸甘油三酯的生产方法，其特征在于所述的甘油三酯的提纯包括：

酯交换反应结束后，在搅拌状态下滴入占物料质量0.96％的浓度为85％的浓H₃PO₄，维持搅拌35min；

所得的混合物在釜温160℃、真空度0.5-0.7Pa下分子蒸馏5-7h； 

残留物加入2％的活性炭脱色，在氮气保护下加热至110-120℃，搅拌30-40min后，冷却至室温；

板框抽滤除去活性炭、磷酸盐后得到多不饱和脂肪酸甘油三酯。