[发明专利]一种多不饱和脂肪酸甘油三酯的生产方法

说明书

技术领域

本发明涉及利用微生物和化学原料制备深海鱼油营养物质替代物的方法，特别是涉及一种多不饱和脂肪酸甘油三酯的生产方法。

背景技术

经研究发现，二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)等多不饱和脂肪酸(PUFA)在神经系统发育、预防心脑血管疾病、抗炎免疫、抗癌、维护视网膜健康等方面可以发挥重要作用。而PUFA不能由人体合成，因此，现有技术多是将深海鱼油中的多不饱和脂肪酸甘油三酯提取并制成保健品、药品等再补充到人体。随着我国心脑血管疾病发病率的逐年升高，多不饱和脂肪酸甘油三酯的开发和推广应用，对于改善我国人民健康，延长寿命具有重要作用和深刻的社会效益。目前，我国市场上EPA和DHA产品主要以其乙酯形式应用，其特点是制备工艺成熟，但该形式产品存在着功能上的缺陷：

1、乙酯型鱼油脂肪酸被小肠吸收进入人体后易作为供能的物质基础而被氧化，影响了鱼油的保健功效。

2、乙酯型产品在胃肠道分解成形成乙醇，对乙醇耐受性差的人易引起一些不良反应，如过敏症，尤其是不适宜儿童。

3、长期以脂肪酸、乙醇为膳食来源，易引起人体内甘油的缺失或不足，从而拉动人体糖代谢，这样易造成人体内糖代谢的不平衡而产生一定的副作用。

天然甘油三酯型鱼油吻合了人们的吸收机能，是人体吸收鱼油的最佳形式。国际市场对EPA和DHA的需求主要是多不饱和脂肪酸乙酯混合物及甘油酯形式，其制备工艺复杂，但是技术含量大大增加，产品价值很高。

石红旗、刘澄凡等研究了脂肪酶催化水解法制备多不饱和脂肪酸甘油酯产品的工艺方法，以国产解脂假丝酵母(Candida lipalytica Lipase)脂肪酶为菌种，在选定脂肪酶的情况下，试验了反应温度、反应时间、酶用量、油水比、乳化剂种类等影响水解反应的主要因素，提出了鱼油水解的适宜条件为：脂肪酶用量300u/g油，乳化剂为Ca(OH)2，油水比为0.4mL/g油，45℃下搅拌12h。用本工艺制得的富含DHA的甘油酯产品中，DHA和EPA含量分别为34.0％和13.9％，总含量为47.9％。

吴可克研究了假丝酶母脂肪酶催化鱼选择性水解反应，确定了油水比、脂肪酶浓度、反应温度、pH、激活剂、溶剂、反应时间、水解率等因素对反应的影响，同时对鱼油水解产物进行了分离和检测，使EPA、DHA在甘油脂型产品中含量达到50％以上。

上述的多不饱和脂肪酸甘油三酯的制造方法，虽可制备出具有较好功效的多不饱和脂肪酸甘油三酯产品，确实具有进步性，但是在实际使用时却发现其工艺过于复杂，甘油三酯酶催化生产过程中酶试剂的成本较高高、反应转化率较低且分离纯化比较困难，因而未能达到最佳的使用效果。

由此可见，上述现有的多不饱和脂肪酸甘油三酯的生产方法显然仍存在有不便与缺陷，而亟待加以进一步改进。如何能创设一种工艺比较简单，成本较低且反应转化率较高的新的多不饱和脂肪酸甘油三酯的生产方法，实属当前的重要研究课题之一，也是当前业界极需改进的目标。

发明内容

本发明的目的在于，克服现有的多不饱和脂肪酸甘油三酯的生产方法存在的缺陷，而提供一种新型结构的多不饱和脂肪酸甘油三酯的生产方法，所要解决的技术问题是使其工艺比较简单，成本较低且反应转化率较高，从而更加适于实用。

本发明的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。依据本发明提出的一种多不饱和脂肪酸甘油三酯的生产方法，包括以下步骤：酶的制备，即对酵母菌培养、发酵获得发酵液；发酵液的分离纯化，获得酶浓缩液；酶的固定化，即先将载体加入酶浓缩液中并进行孵育，再经清洗获得固化酶；酯交换反应，即丙三醇与多不饱和脂肪酸乙酯在固化酶作用下反应，制得甘油三酯；甘油三酯的提纯。

本发明的目的及解决其技术问题还可采用以下技术措施进一步实现。

前述的一种多不饱和脂肪酸甘油三酯的生产方法，所述的酯交换反应是指：在间歇式酶反应器中加入质量比1∶6-8∶0.6-0.7的丙三醇、多烯酸乙酯与固化酶，并加入占丙三醇、多烯酸乙酯与固化酶总质量8％的油酸钾作为均相化试剂，温度为25-30℃，初始水活度为0.40-0.50，反应6-8h制得甘油三酯。

前述的一种多不饱和脂肪酸甘油三酯的生产方法，所述的酶的固定化包括：按照酶液活力与载体质量比为8000∶1U/g，把载体加入酶浓缩液中；在20-30℃、摇床反应器80r/min转速下、孵育8-10h固定化；吸去酶液，用pH8.0 0.1mol/L的磷酸缓冲液清洗，所得固化酶于4℃保存。