[发明专利]蔗糖密度梯度紫外光定量法检测口蹄疫抗原146S含量的方法

权利要求书

1.蔗糖密度梯度紫外光定量法检测口蹄疫抗原146S含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)预处理病毒液除去杂蛋白；

(2)超速离心病毒液，用PBS液重悬至原体积的1/8～1/12，得到病毒浓缩液，置于2～8℃冰箱中备用；

(3)制备15％～45％均匀线性蔗糖梯度；

(4)利用制备的15％～45％均匀线性蔗糖梯度对所述病毒浓缩液进行蔗糖密度梯度超速离心；

(5)弃掉梯度顶部1～2ml液体，将连接在连续流紫外分光光度计流动样品池上进样端的长针头缓慢插入待检各管样品的管底，按照连续流紫外分光光度计的操作程序，对每管样品泵入流动样品池的各个级份进行连续测定OD_259nm值；

(6)计算被检测样品OD值峰面积，根据下列公式：

FR×PA×FSD×1000S×PL×E×W,]]>

计算出病毒液中146S的含量，其中，FR是蔗糖通过样品池的单位时间的体积流量，W是加在梯度上的样品原始体积；或者FR是蔗糖通过样品池的单位时间的重量流量，W是加在梯度上的样品原始重量；PA是峰面积；FSD是吸光度单位；S是速度；PL是流动样品池的光程长度；E为校正系数，E＝76；

步骤(1)中，预处理病毒液除去杂蛋白的方法为：将待检病毒液样品按照其体积2％～10％的量加入氯仿或三氯乙烯，将病毒液与有机溶剂充分乳化混匀5～10分钟后，采用3000～4000rpm离心5～15分钟，取上清病毒液；

步骤(2)中，超速离心的转速为30000～40000rpm，离心时间为1.5～2.5小时；

步骤(3)中，制备15％～45％均匀线性蔗糖梯度的方法为：用0.04mol/L磷酸盐，0.15mol/L NaCl pH7.6～8.0的PBS缓冲液配制15％和45％的蔗糖溶液，用蔗糖密度梯度生成仪制备15％～45％均匀线性蔗糖梯度；

步骤(4)中，超速离心为8～12℃下30000～40000rpm离心2.5～3小时。