[发明专利]非病毒载体及其制备方法与应用

权利要求书

1.式I所示化合物，

2.一种制备权利要求1所述化合物的方法，包括如下步骤：在惰性气氛中，将叶酸与三乙胺混匀至完全溶解后，在避光及惰性气氛的条件下，再加入N羟基琥珀酸胺酯和N，N′-二环己基碳二亚胺进行反应，得到权利要求1所述化合物。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述叶酸、三乙胺的摩尔比为2-2.5∶30-40，优选2.26∶36，反应温度为25-30℃，优选28℃，反应时间为12-16小时，优选14小时；所述N羟基琥珀酸胺酯与叶酸的摩尔比为2-2.5∶2-2.5，优选2.26∶2.26，N，N′-二环己基碳二亚胺与叶酸的摩尔比为的2-2.5∶2-2.5，优选2.26∶2.4，反应时间为45-50小时，优选48小时；反应温度为25-30℃，优选28℃；反应介质选自无水二甲基亚砜和无水N，N-二甲基甲酰胺中的至少一种。

4.式II所示化合物，

5.一种制备权利要求4所述化合物的方法，包括如下步骤：在避光及惰性气氛的条件下，将权利要求1所述化合物与三乙胺、2-巯基乙胺盐酸盐进行反应，得到权利要求4所述化合物。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述权利要求1所述化合物与2-巯基乙胺盐酸盐的摩尔比为0.55-0.60∶0.60-0.65，优选0.56∶0.62；所述三乙胺与2-巯基乙胺盐酸盐的用量比为2mL-4mL∶60mg-80mg；反应温度为25-30℃，优选28℃，反应时间为15-20小时，优选18小时；反应介质选自无水二甲基亚砜和无水N，N-二甲基甲酰胺中的至少一种。

7.式III所示化合物，

8.一种制备权利要求7所述化合物的方法，包括如下步骤：将权利要求4所述化合物、式IV所示化合物与三乙胺进行反应，得到权利要求7所述化合物；

所述式IV化合物的分子量为3500±350Da。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述权利要求4所述化合物与式IV所示化合物的摩尔比为0.112-0.118∶0.055-0.060，优选0.115∶0.057；所述三乙胺与所述式IV化合物的用量比为0.01mL-0.03mL∶0.055mol-0.060mol，优选0.02mL∶0.057mol；反应温度为30-40℃，优选35℃；反应时间为45-50小时，优选48小时；反应介质为pH值为7.2～7.4的磷酸盐缓冲溶液；其中，所述磷酸盐缓冲溶液中，NaCl的浓度为137mmol/L，KCl的浓度为2.7mmol/L，Na₂HPO₄的浓度为4.3mmol/L，KH₂PO₄的浓度为1.4mmol/。

10.式V所示化合物，

其中，m＝145，n为小于m的正整数。

11.根据权利要求10所述的化合物，其特征在于：式V所述化合物的相对数均分子量为20600，分子量分布为1.73。

12.一种制备权利要求10或11所述化合物的方法，包括如下步骤：将权利要求7所述化合物与式VI所示化合物进行反应，得到权利要求10或11所述化合物；

式VI中，m＝145，n为小于m的正整数，式VI所示化合物的相对数均分子量为25000Da。

13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于：所述权利要求7所述化合物与式VI所示化合物的质量比为56-60∶315-325，优选59.6∶320；反应介质选自二甲基亚砜和N，N-二甲基甲酰胺中的至少一种；反应的温度为30-40℃，优选35℃；反应的时间为6-48小时，优选48小时。

14.一种非病毒载体，是聚乙烯亚胺与权利要求10或11所述化合物共混而得的纳米颗粒。

15.根据权利要求14所述的载体，其特征在于：所述纳米颗粒的粒径为70-90纳米；所述聚乙烯亚胺与权利要求10所示化合物的摩尔比为10-15∶85-90；所述聚乙烯亚胺的分子量为25kDa；共混的温度为20-30℃，共混的时间为15-20分钟。