[发明专利]一种光滑球拟酵母突变株及其在发酵生产丙酮酸中的应用

权利要求书

1.光滑球拟酵母(Torulopsis glabrata)NBRC 0005突变株，该突变株于2009年5月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保减号为CGMCC No.3077。

2.如权利要求1所述的光滑球拟酵母突变株，其特征在于：该突变株以光滑球拟酵母(Torulopsis glabrata)NBRC 0005为出发菌株，经紫外线诱变，突变株平板初筛，三角瓶发酵复筛，最后确定的光滑球拟酵母突变株CGMCC No.3077的个体形态特征为圆形或卵圆形，边缘整齐，表面光滑、湿润、粘稠，易从培养基上挑起；液体培养的个体比固体培养的个体稍大，繁殖方式为出芽生殖；群体形态特征为：对数期颜色为白色，菌落衰老期为灰白色。

3.采用如权利要求1或2所述光滑球拟酵母突变株CGMCC No.3077在发酵生产丙酮酸中的应用。

4.按照权利要求3所述的光滑球拟酵母突变株在发酵生产丙酮酸中的应用，其特征在于：

1)种子培养：将菌种转接到液体培养基中，其中葡萄糖质量百分比为2％，蛋白胨质量百分比2％，酵母粉质量百分比1％，琼脂质量百分比2％，培养温度29℃，培养24小时；

2)摇瓶发酵：无菌操作，按10％的接种量将培养好的种子接种于100ml液体发酵培养基中，液体发酵培养基中含有糖质质量百分比为15％～20％，氮源质量百分比为1.0％～3.0％，无机盐质量百分比为0.01％～0.1％，维生素质量百分比为0.0000001％～0.01％；摇瓶发酵采用1％～4％的碳酸钙作为酸的中和剂，于摇床上进行发酵，转数为180～200rpm，发酵温度为29℃；发酵时间为72小时；

3)发酵罐中发酵：无菌操作，按5％～15％的接种量将摇瓶发酵培养好的种子接种于发酵罐中进行发酵，发酵培养基成分同步骤2)，发酵温度为29℃；发酵时间为40～55小时；发酵罐中的通气量为0.6～1.0vvm；通过流加5～8M NaOH、5～8M工业氨水或液氨作为丙酮酸的中和剂，维持发酵体系的pH5～6.5，保证菌体生长、繁殖与代谢发酵的正常进行；

4)在发酵罐中进行酵母发酵生产丙酮酸，发酵结束，得上清液，其中含有目的产物丙酮酸至少0.5M，以丙酮酸钠计，质量百分含量5.5％以上。

5根据权利要求4所述的光滑球拟酵母突变株在发酵生产丙酮酸中的应用，其特征在于：在发酵罐整个发酵过程中，菌体生长繁殖为主的迟滞期和对数生长前期的0～15小时，pH为5.0～5.5，以利于菌体生长；在菌体生长对数生长中后期的16～24小时，开始大量产酸，pH调为5.5～6.0；在菌体生长平稳期的25～55小时，以产酸为主，将发酵液的pH调为6.0～6.5，使菌体处于一个相对中性的微环境中，加速菌体分泌丙酮酸，缩短发酵周期。

6根据权利要求4所述的光滑球拟酵母突变株在发酵生产丙酮酸中的应用，其特征在于：所述糖质原料为葡萄糖、蔗糖和麦芽糖中的一种或几种。

7根据权利要求4所述的光滑球拟酵母突变株在发酵生产丙酮酸中的应用，其特征在于：所述氮源包括鱼蛋白胨、大豆蛋白胨、豆饼水解液、黄豆饼粉、硫酸铵、氯化铵和尿素中的一种或几种。

8根据权利要求4所述的光滑球拟酵母突变株在发酵生产丙酮酸中的应用，其特征在于：所述无机盐为磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二铵、磷酸氢二钠和七水硫酸镁中的一种或几种。

9根据权利要求4所述的光滑球拟酵母突变株在发酵生产丙酮酸中的应用，其特征在于：所述维生素为烟酸、生物素、维生素B1和维生素B6中的一种或几种。