[发明专利]诊断乳腺癌的分子标记物

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地，涉及一种诊断乳腺癌的蛋白质免疫印迹方法，及硫氧还蛋白和硫氧还蛋白结合蛋白2用作检测乳腺癌的蛋白质分子标记，在诊断乳腺癌的临床中的应用。

背景技术

乳腺癌是危害女性健康的主要疾病之一，全世界每年约有一百多万妇女患有乳腺癌。男性也可患乳腺癌，但男性患乳腺癌的机率比女性要少近100倍。乳腺癌的发病期多数在40-60岁，其发生原因尚无定论，一般认为与性激素的变化有关，并具有一定的家族性。早期乳腺癌可无任何自觉症状，病变晚期可出现乳腺肿块，肿块质地硬韧，边界不甚清晰，无包膜感，推之移动性小，多数无明显疼痛。到目前为止，已有一些基因异常表达被确定与乳腺癌发生发展有关，但被确定的乳腺癌相关基因在乳腺癌中的异常表达率并不高，乳腺癌早期诊断率仍有待提高。此外，传统的乳腺癌手术加化疗以及近年来配合使用的多种基因治疗方法预后效果较差，没有显著提高乳腺癌患者的生存率，因而寻找新的乳腺癌相关基因尤其是乳腺癌异常表达基因对于探讨乳腺癌的发病机制具有重要意义，迫切需要寻找新的在乳腺癌中表达变化显著的基因或蛋白。

硫氧还蛋白(thioredoxin，TRX)又称白细胞介素-1样细胞因子、成人T细胞白血病演化因子、早孕因子等。人硫氧还蛋白是由104个氨基酸组成的分子量为12kDa的多肽。硫氧还蛋白在细胞增殖、生存及抑制凋亡过程中起着重要的调节作用。作为一种生长因子，硫氧还蛋白可以被淋巴细胞、肝细胞、成纤维细胞以及许多癌细胞系分泌，并且诱导其自身生长。对一系列人原发肿瘤研究结果显示，将肿瘤组织与正常组织相比，肿瘤组织中硫氧还蛋白过度表达，其表达水平和细胞增殖呈显著正相关。

硫氧还蛋白结合蛋白2(TRX-binding protein-2，TBP-2)又称为维生素D₃上调蛋白1(vitamin D₃ up-regulated protein 1，VDUP1)，分子量约为46kDa。硫氧还蛋白结合蛋白2广泛分布在动物的多种组织中包括：肾上腺、心脏、肺组织、胸腺、脾脏、睾丸、骨骼肌、肾脏、肝脏、乳腺、卵巢等，其中它在肺组织中的表达量相对较高，而在脑组织和肝脏组织中的表达量相对较低。硫氧还蛋白结合蛋白2可以与硫氧还蛋白相互作用。在一些肿瘤组织中，硫氧还蛋白结合蛋白2表达缺失，若将硫氧还蛋白结合蛋白2转染到癌细胞中，过表达的硫氧还蛋白结合蛋白2抑制细胞生长，促使细胞凋亡。硫氧还蛋白结合蛋白2还抑制细胞周期，使细胞周期滞留在GO期，这表明硫氧还蛋白结合蛋白2与肿瘤生长密切相关。

因此，硫氧还蛋白和硫氧还蛋白结合蛋白2是研究乳腺癌新的靶位点。但是到目前为止，现有技术中未见硫氧还蛋白和硫氧还蛋白结合蛋白2与乳腺癌的相关性的报道。

发明内容

本发明旨在提供一种诊断乳腺癌分子标记物。本申请找到了一种在乳腺癌包块组织和正常周边组织中存在差异表达的蛋白质。免疫印迹实验证实，硫氧还蛋白和硫氧还蛋白结合蛋白2的确在乳腺癌包块组织和正常周边组织中存在明显差异表达。

基于硫氧还蛋白和硫氧还蛋白结合蛋白2与乳腺癌的这种相关性，以这两种蛋白作为一个蛋白分子标记对其表达量进行检测可以用于检测乳腺癌。

本发明的目的在于提供一种体外检测乳腺细胞中硫氧还蛋白和硫氧还蛋白结合蛋白2的表达是否异常的方法；

因此，本发明的另一目的在于提供一种硫氧还蛋白和硫氧还蛋白结合蛋白2用作检测乳腺癌的蛋白质分子标记的应用。

鉴于到目前为止，还没有硫氧还蛋白和硫氧还蛋白结合蛋白2与乳腺癌的相关性的报道，因此，本发明的这一发现将为乳腺癌的诊断和/或治疗提供一条新的辅助途径。

为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：

诊断乳腺癌的方法，包括从样品中获得乳腺包块组织和正常周边组织样品，测定和比较样品中硫氧还蛋白和硫氧还蛋白结合蛋白2的表达量。

其中蛋白的表达水平通过蛋白免疫印迹法测定。

其中当硫氧还蛋白表达水平高于、硫氧还蛋白结合蛋白2表达水平低于正常乳房组织的表达水平时，判断为乳腺癌。

比较包块组织与正常周边组织中硫氧还蛋白和硫氧还蛋白结合蛋白2的表达是用比较用特异性抗硫氧还蛋白/硫氧还蛋白结合蛋白2的抗体检测得到的包块组织中硫氧还蛋白、硫氧还蛋白结合蛋白2的表达量与正常周边组织该两种蛋白量进行比较，如测得的包块组织硫氧还蛋白表达量高于正常周边组织，硫氧还蛋白结合蛋白2表达量低于正常周边组织时，诊断为乳腺癌。

该方法包括以下步骤：