[发明专利]蓝舌病病毒快速检测试纸条及制备方法

权利要求书

1、一种蓝舌病病毒快速检测试纸条，七特征在于由样品吸收垫(1)、硝酸纤维膜(3)、吸水垫(6)和底板(7)构成，样品吸收垫(1)、硝酸纤维膜(3)、吸水垫(6)依次排列固定在底板(7)上，样品吸收垫(1)为呈线性排列的固定于不透水材料上的多孔纤维，其上载有胶体金垫(2)，胶体金垫(2)为蓝舌病病毒VP7蛋白的单克隆抗体和胶体金的结合物，检测线(4)位于所述的硝酸纤维膜上(3)，其上包被或喷上蓝舌病病毒多克隆抗体，对照线(5)位于所述的硝酸纤维膜(3)上，其上包被或喷上proteinA。

2、根据权利要求1所述的蓝舌病病毒快速检测试纸条，其特征在于所述的不透水材料为PVC。

3、根据权利要求1所述的蓝舌病病毒快速检测试纸条，其特征在于所述的多孔纤维为玻璃纤维。

4、根据权利要求1所述的蓝舌病病毒快速检测试纸条的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

一、蓝舌病病毒VP7蛋白单克隆抗体的制备：用纯化的蓝舌病病毒免疫BALB/c小鼠三次；取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，用间接ELISA方法检测分泌抗BTV VP7蛋白的特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞，用BALB/c小鼠制备单抗腹水；

二、胶体金的烧制和待标记单抗的准备：用柠檬酸钠还原法烧制直径20nm～50nm胶体金颗粒，取-20℃保存的纯化好的蓝舌病病毒的VP7蛋白的单克隆抗体，将其浓度调整为1mg/mL，4℃保存备用；

三、胶体金标记抗体最适稳定量的测定：将准备好的待标记单克隆抗体做系列稀释为5μg/mL～90μg/mL，分别取1mL，加入每管1mL分装好金胶溶液中，以测定最适标记量；

四、抗体的胶体金标记：将2mg蓝舌病病毒VP7蛋白的单克隆抗体溶于100mL胶体金溶液，在电磁搅拌器搅拌下，缓慢将单克隆抗体溶液加入胶体金溶液中进行标记；

五、胶体金标记抗体的纯化：标记好单克隆抗体的胶体金溶液纯化后，于含1％牛血清白蛋白和含0.02％NaN₃的0.02mol/L pH8.2Tris-HCl缓冲液中重悬为原体积的1/10，4℃保存备用；

六、胶体金标记抗体吸附玻璃纤维：用0.02mol/LpH8.6TBS稀释金标单克隆抗体，吸附于玻璃纤维滤纸上，制成了吸附有胶体金标记抗体的玻璃纤维；

七、检测线和控制线的印迹：在硝酸纤维膜上设定出检测线和对照线位置，用喷膜机分别在其所在位置喷上2.5mg/L的蓝舌病多克隆抗体和proteinA形成检测线和对照线。

八、胶体金标记试纸条的组装：在PVC底板上按顺序组合样品吸收垫、吸附有胶体金标记单克隆抗体的玻璃纤维、包被有检测线和对照线的硝酸纤维膜和吸水垫制备成检测试纸条，装入塑料外壳的检测卡内。