[发明专利]蓝舌病病毒快速检测试纸条及制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是一种用于检测蓝舌病病毒抗原的快速检测试纸条，以及这种快速检测试纸条的制备方法。

背景技术

蓝舌病(Bluetongue disease，BLU)是由呼肠孤病毒科(reoviridae)环状病毒属(Obivirusgenus)的蓝舌病病毒(Bluetongue virus，BTV)引起的一种烈性动物传染病，由库蠓传播，主要危害绵羊、山羊、牛等家畜，并在世界范围内广泛流行，世界动物卫生组织(Worldorganisation for animal health，OIE)将BLU列为重要动物传染病。在很多国家动物贸易协定中，BLU是必须进行检疫的传染病之一。近年来，随着气候变暖，BLU在欧洲许多国家的发病率增加，严重影响着国际动物贸易。

BTV共有24个血清型，BTV基因组含有10个双链RNA片段(dsRNA)，由19218bp组成，编码7种结构蛋白(VP1-VP7)和4种非结构蛋白(NS1、NS2、NS3和NS3A)，7种结构蛋白的4种形成双层蛋白衣壳，外壳主要由VP2和VP5构成，而内壳主要由VP3和VP7构成。VP2是病毒型特异性抗原和血凝蛋白，诱导产生中和抗体，还与病毒的毒力和细胞吸附作用有关。VP5也与中和抗体的产生和病毒毒力有关。VP7是核芯衣壳表面壳粒的主要成分，约占病毒总蛋白的1/3，是病毒可溶性群特异性抗原。在BLU检测方法中，琼脂扩散试验(Agar Gel Immuno Diffusion，AGID)因其操作简便、成本低而在世界范围内被广泛推广应用，也是迄今OIE推荐使用的方法之一，但该方法使用的抗原与相关病毒如鹿流行性出血病病毒(Epizootic hemorrhagic disease virus of deer，EHDV)存在一定的交叉反应性，所以AGID检测的特异性较差。

中国专利申请号200810231379.1公开了一种“蓝舌病病毒检测试纸条”，包括支撑层、附着在支撑层上的吸附层，所述吸附层是由样品吸附纤维层、金标抗体纤维层、纤维素膜层及吸水层依次拼接而成，所述纤维素膜层上标记有用蓝舌病病毒抗体溶液印制的隐形检测印迹，纤维素膜层上还标记有用羊抗小鼠、兔抗小鼠、羊抗牛或兔抗牛IgG溶液印制的隐形对照印迹，所述金标抗体纤维层上附着有与隐形检测印迹对应的以胶体金标记的抗蓝舌病病毒的多克隆抗体或单克隆抗体。中国专利申请号200810226505.4公开了一种“蓝舌病病毒抗原的ELISA检测方法及试剂盒”，是用抗蓝舌病病毒VP7蛋白的单克隆抗体作为包被及酶标抗体的双抗夹心ELISA检测方法。该试剂盒包括作为包被及酶标抗体的抗蓝舌病病毒VP7蛋白的单克隆抗体。中国专利申请号200810223912.X公开了一种“蓝舌病病毒的生物条形码检测方法”，是以蓝舌病病毒的VP7蛋白作为检测对象进行的生物条形码检测方法。所述MMP探针包被有抗VP7蛋白的单克隆抗体，NP探针包被有抗VP7蛋白的多克隆抗体。所述对蓝舌病病毒进行生物条形码检测的条形码DNA链具有序列表中SEQ ID No：1的核苷酸序列，互补探针NP链具有序列表中SEQ ID No：2的核苷酸序列。

竞争酶联免疫吸附试验(c-ELISA)可将蓝舌病与相关病毒病区别，而双抗体夹心法ELISA可直接进行病毒抗原的检测。

目前，研制快速、便捷、适合于口岸检疫和现场诊断的检测试纸条，在蓝舌病的快速诊断、检疫和流行病学调查中具有更重要的应用价值。

发明内容

本发明的目的是提供一种直接检测蓝舌病病毒抗原的蓝舌病病毒快速检测试纸条。

本发明的另一目的是提供这种检测试纸条的制备方法。

本发明所述的蓝舌病病毒快速检测试纸条由样品吸收垫、硝酸纤维膜、吸水垫和底板构成，样品吸收垫、硝酸纤维膜、吸水垫依次排列固定在底板上，样品吸收垫为呈线性排列的固定于不透水材料上的多孔纤维，其上载有胶体金垫，胶体金垫为蓝舌病病毒VP7蛋白的单克隆抗体和胶体金的结合物，检测线位于所述的硝酸纤维膜上，其上包被或喷上蓝舌病病毒多克隆抗体，对照线位于所述的硝酸纤维膜上，其上包被或喷上protein A。

上述的不透水材料为PVC，所述的多孔纤维为玻璃纤维。

本发明的检测蓝舌病病毒抗原快速诊断试纸条仅与BTV病毒抗原发生特异性免疫反应，呈现明显的检测线和对照线，而与其它相关病毒(如EHDV、AKV、VSV、PPRV等)没有任何免疫反应，不出现检测线，只出现对照线。

本发明所述的蓝舌病病毒快速检测试纸条的制备方法由以下步骤组成：