[发明专利]细胞-组织培养大规模生产膏桐植株的方法

权利要求书

1.一种细胞-组织培养大规模生产膏桐植株的方法，其特征是 包括以下步骤：

(1)、膏桐外植体的选取及培养：选取膏桐茎段，用洗洁精洗干 净后，在流水下冲洗10min，然后转到洁净工作台上，吸干水分，先 用体积比70％酒精灭菌30秒，再转入0.1％的HgCl₂溶液中灭菌5分 钟，无菌蒸馏水冲洗5次，将茎段剪成1cm长的小段，接种于愈伤组 织诱导培养基MS+6-BA 2mg/L+NAA1mg/L+蔗糖30g/L，用质量比0.8％ 琼脂固化，高温灭菌前PH调为5.8，培养温度25℃，外植体接种20 天后可见明显芽；

(2)、膏桐细胞悬浮培养：将芽研磨后接种，加入1～3倍重量 的细胞悬浮液体培养基，容器放入旋转式摇床，于温度25±2℃，黑 暗条件下进行膏桐细胞悬浮培养2～4天，摇床转速为80～130 r/min，细胞悬浮液体培养基是：MS+6-BA 0.2～0.5mg/L+NAA 1～ 6mg/L+LH 0.5～1.5mg/L+蔗糖19～22g/L，PH值5.8～6；

(3)、对培养的膏桐细胞进行细胞生长测定；

(4)、丛芽增殖培养：选取生长进入静止期的膏桐细胞，接入固 体的丛芽增殖培养基，光照强度1000～2000LX，丛芽增殖培养基是： MS+6-BA 0.1～1mg/L+NAA 0.1～1.5mg/L+蔗糖20～30g/L， 用质量比为0.5％～0.8％琼脂固化，PH值5.8～6，培养时间为15～ 20天；

(5)、生根培养：选择生长良好的丛芽接入生根培养基进行生根 培养，最后生产出膏桐苗，生根培养基是：MS+NAA 0.1～1mg/L；

(6)、出瓶栽培：出瓶栽培的苗先保湿15～20天，保持温度 不低于17℃。

2.如权利要求1所说的方法，其特征是膏桐芽的研磨使用砚体。

3.如权利要求1所说的方法，其特征是将增殖的细胞悬浮液倒 入有滤纸的布式漏斗，抽去培液，再用蒸馏水洗涤，然后进行细胞生 长测定。

4.如权利要求1所说的方法，其特征是丛芽增殖培养基为：MS +6-BA 0.9～1mg/L+NAA 0.4～0.6mg/L+蔗糖20～30g/L。

5.如权利要求1所说的方法，其特征是生根培养基为：MS+NAA 0.4～0.6mg/L。