[发明专利]利用RNA干扰文库筛选肿瘤转移抑制基因的方法

权利要求书

1、一种利用RNA干扰文库筛选肿瘤转移抑制基因的方法，该方法是：利用免疫缺陷小鼠细胞在体移植肿瘤转移模型比细胞模型更好地模拟肿瘤转移发生，利用RNA干扰文库使得人类基因组的各种基因分别在肿瘤细胞株任意地降低表达，使得其中肿瘤转移抑制基因降低表达的细胞形成肿瘤转移的潜能大大增强，这样，将RNA干扰文库处理的细胞注入免疫缺陷小鼠体内后，在对照细胞不能形成肿瘤转移的条件下，肿瘤转移抑制基因降低表达的细胞可以形成肺肿瘤，通过分离肺肿瘤，并克隆肺肿瘤内的降低表达基因可以确定并筛选新的肿瘤转移抑制基因。

2、根据权利要求1所述的利用RNA干扰文库筛选肿瘤转移抑制基因的方法，其特征在于所述的肿瘤细胞进行如下表型筛选：

a.注入小量肿瘤细胞到免疫缺陷小鼠体内后时，对照和RNA文库处理细胞都不形成肺肿瘤；

b.注入适量肿瘤细胞到免疫缺陷小鼠体内后时，对照细胞不形成肺肿瘤，而RNA文库处理细胞形成肺肿瘤；

c.注入大量肿瘤细胞到免疫缺陷小鼠体内后时，对照和RNA文库处理细胞都形成肺肿瘤，两者相比较，RNA文库处理细胞形成更多肺肿瘤；

3、根据权利要求2所述的利用RNA干扰文库筛选肿瘤转移抑制基因的方法，其特征在于所述的对表型筛选后的肿瘤细胞进行如下候选基因的鉴定：

a.从存活下来的肿瘤内提取基因组DNA；

b.PCR扩增从RNA干扰文库中插入的DNA片段；

c.TA克隆法克隆PCR扩增的DNA片段；

d.挑选克隆，纯化DNA；

e.基因测序确定筛选基因。

4、根据权利要求3所述的利用RNA干扰文库筛选肿瘤转移抑制基因的方法，其特征在于所述的对筛选基因对肿瘤转移的影响作如下分析：

a.利用RNA干扰降低基因表达作Loss-of-function分析；

b.利用过表达作Gain-of-function分析；

c.利用生化实验分析筛选基因影响肿瘤转移的机制。

5、根据权利要求3所述的利用RNA干扰文库筛选肿瘤转移抑制基因的方法，其特征在于所述的对筛选基因在转移肿瘤内的状态作如下分析：

a.检测筛选基因是否在转移肿瘤细胞和样品中突变；

b.检测筛选基因是否在转移肿瘤细胞和样品中低表达；

c.检测筛选基因是否在转移肿瘤细胞和样品中被修饰，如甲基化等。