[发明专利]一种检测马凡综合症的试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种产前诊断马凡综合症的方法，特别是一种利用多重聚合酶链 式反应(PCR)和单碱基延伸反应的马凡综合症的产前诊断方法，还涉及一种用于 本发明诊断方法的试剂盒。

背景技术

马凡综合症(Marfan syndrome；MFS)是最常见的遗传性结缔组织疾病之一， 主要累及骨骼、眼部和心血管系统。其临床特征为：躯体异常，如体格细高，四 肢及指(趾)细长，被称为蜘蛛样指(趾)；眼部晶状体脱位；关节松弛；心脏大 血管病变，如主动脉根及升主动脉瘤样扩张以及急性或慢性主动脉内膜破裂，形 成夹层动脉瘤。另外，还有硬脑脊膜扩张、高腭弓、漏斗胸或鸡胸以及肺和神经 系统畸形等一系列综合征象。但是，这一综合症的临床表现也可以是不完全显性 的，如缺少心脏大血管的典型表现者，常被称为隐性马凡综合症。

马凡综合症是一种常染色体显性遗传性疾病，人群发病率大约为1/10000， 按此比例推算，中国有马凡综合症病例13万之多。马凡综合症多有家族史，约 15％～25％为散发病例，在种族和性别上，发病没有明显差异。马凡综合症患者 的父母中有75％可诊断出患有该病，马凡综合症患者子女的发生率约为50％。当 父母均不是患者的情况下，如果第一个子女是马凡综合症患者，那么他们再生育 一小孩时，由于存在种群镶嵌现象，该小孩的发病率会高于人群的平均水平。据 报道，有1/3的马凡综合症患者死于32岁以前，2/3死于50岁左右，其平均 年龄仅40岁；其死亡的主要原因绝大多数是心血管病变造成的。最常见的症状 是主动脉瘤破裂、心包压塞或主动脉瓣关闭不全和二尖瓣脱垂而致的心力衰竭或 心肌缺血。

为了能在孕早期或孕中期对异常儿做出诊断，及时治疗或处理。目前，可以 进行产前诊断的疾病类型主要有染色体病(300多种)，X连锁遗传病(70余种)， 先天性代谢缺陷病(新生儿先天性代谢病的发生率约8‰)和先天畸形。其中， 染色体异常的遗传病，比如唐氏综合症，特纳综合症等，一般表现为染色体片段 的重复和缺失，以及染色体的非整倍性(如多一条额外的染色体，如唐氏综合症 者多一条额外的21号染色体，故亦称为21三体综合症)。通过多种方法对染色体 染色，可以检测出以上染色体缺陷。目前这些方法已经应用于临床，通过检测胎 儿是否带有异常染色体来进行优生，为患染色体遗传病的家系带去了福音，也大 大减轻了社会的经济负担。然而，对于马凡综合症，其基因缺陷是在碱基水平的， 表现为碱基的点突变，无义突变，剪接位点突变，终止密码子的突变等，用染色 体的方法是无法达到检测目的的。而常规的产前B超检查也难以发现胎儿的异常， 这给优生带来了很大的挑战。一个患儿的出生不仅给家庭，还给社会带来了沉重 的负担。因此，寻找一种检测马凡综合症的试剂盒具有重要的意义。国内外目前 也还未见切实有效制备该试剂盒的方法的报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服上述背景技术的不足，提供一种操作简便、 设备简单、结果准确度高的检测马凡综合症的试剂盒；同时，本发明还提供一种 利用多重聚合酶链式反应(PCR)和单碱基延伸反应制备该试剂盒的方法。

本发明采用的技术方案是：

一种检测马凡综合症的试剂盒，其特征在于：包括特异性引物、多重PCR反 应扩增液、洁净液、单碱基延伸反应液，所述的特异性引物包括每条含18-25个 碱基的六对或六对以上多重PCR扩增引物和与检测位点相匹配的含40-45个碱基 的突变检测引物，其中突变检测引物由5’端的地址序列和3’端的突变检测区组 成。

所述的多重PCR引物序列如下：

1、TTTTTGTTTTAGACCCAATGTCT，

GACAATACACTGATTTCCGCC；

2、AAATAACTACAGATCAACTCCTGTGAG，

TTTCTGGCATAGACACTGATCG；

3、TGGCTGTCTCAATGGAGG，

ATTTTAAAAACCATTACCTCTTTCAC；

4、TTGATTTTAGACATTGATGAGTGTT，

CGCATTACACACGCAATGAAA；

5、TAATAAGTGCCTTTCTCTGCCA，

GGGAAGCATTCACATCTGTAG；

6、AAGATTCTGCCTGATGCTTTT，