[发明专利]一种微生物转化制备(S)-1-(3,5-二三氟甲基)苯基乙醇的方法

说明书

(一)技术领域

本发明涉及一种重要的手性药物中间体(S)-1-(3，5-二三氟甲基)苯基乙醇的生物转化制备方法，属于生物催化技术领域。 

(二)背景技术

(S)-1-(3，5-二三氟甲基)苯基乙醇是一种重要的手性药物中间体，可用于合成NK-1受体拮抗剂，该药物可有效地治疗抑郁及其他精神疾病，在治疗一系列中枢和末梢神经系统抑制中具有很好的潜在疗效。 

目前所知的制备方法主要有三条路径： 

(1)化学法。主要是以稀有金属(铑、钌等)为催化剂合成(S)-1-(3，5-二三氟甲基)苯基乙醇，反应收率和ee值均较高，但稀有金属催化剂的价格昂贵，不适宜工业化生产。 

(2)酶转化法。采用提取纯化后的酶(如羰基还原酶)进行1-(3，5-二三氟甲基)苯基乙酮的不对称还原，优点是立体选择性好，副产物少。但反应过程中需要解决辅酶再生问题，外加辅酶的价格昂贵。如David等采用来自红平红球菌Rhodococcus erythropolis的醇脱氢酶酶法合成(S)-1-(3，5-二三氟甲基)苯基乙醇，对映体过量值＞99.9％，转化率＞98％。但在需要辅因子NADH的醇脱氢酶酶催化还原过程中还需要加入甲酸脱氢酶(formate dehydrogenase，FDH)以实现辅因子的原位再生，在实际应用中受到一定的限制。 

(3)微生物细胞生物转化法。即采用完整的微生物细胞作为生物催化剂进行1-(3，5-二三氟甲基)苯基乙酮的不对称还原。微生物细胞含有完 整的酶系，该方法不需要对胞内酶进行提纯，催化反应中也不需额外添加昂贵的辅酶，因而减少了工序并降低了成本。但现有已知可用于生物不对称还原制备(S)-1-(3，5-二三氟甲基)苯基乙醇的菌种(如红酵母等)，对映体过量值不超过88.5％。 

(三)发明内容

本发明目的是为了提供一种高光学纯度，工艺简单和易于工业化生产的(S)-1-(3，5-二三氟甲基)苯基乙醇的生物制备方法。 

为达到发明目的本发明采用的技术方案是： 

一种微生物转化制备(S)-1-(3，5-二三氟甲基)苯基乙醇的方法，所述方法包括：在以1-(3，5-二三氟甲基)苯基乙酮为底物、以热带假丝酵母(Candida tropicalis)104的发酵产物为酶源的反应体系中，于28～34℃下进行不对称还原反应，反应结束后转化液经分离纯化得到所述的(S)-1-(3，5-二三氟甲基)苯基乙醇；所述热带假丝酵母(Candida tropicalis)104保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉武汉大学，430072，保藏编号：CCTCC No：M 209034，保藏日期：2009年2月27日；所述发酵产物为热带假丝酵母104经发酵获得的发酵液或湿菌体；可将湿菌体加入含有1-(3，5-二三氟甲基)苯基乙酮底物的缓冲溶液中作为反应体系，或直接按需要量将底物加入热带假丝酵母104发酵液中作为反应体系。 

所述反应体系中底物初始浓度为10～90mmol/L，发酵产物加入量以其所含菌体的湿重计为50～400g/L。湿重法系单位体积培养物经离心后将湿菌体进行称重。 

所述反应体系中还添加有终浓度为10～100g/L的麦芽糖作为辅助底 物，以促进反应的进行。 

优选的，所述反应体系的溶剂为0.1M，pH 8.0的磷酸缓冲液，将底物和湿菌体加入缓冲液中，作为反应体系。 

所述不对称还原反应的反应温度为28～34℃，反应时间为16～40小时。在此条件下所得的转化液进行手性气相色谱(GC)分析测定表明，转化产物的主要组分为(S)-1-(3，5-二三氟甲基)苯基乙醇。 

所述发酵产物由如下方法制备得到：热带假丝酵母104接种至发酵培养基，于温度28～34℃下培养16～30小时后，得发酵液，或者将发酵液过滤得到湿菌体。所述发酵培养基为常规适用于热带假丝酵母的液体发酵培养基。 

本发明中，所述发酵培养基终浓度组成如下：葡萄糖40～60g/L，酵母粉10～15g/L，氯化铵2～5g/L，磷酸二氢钾0.5～2g/L，磷酸氢二钾0.5～2g/L，硫酸镁0.1～1g/L，溶剂为水，pH值6～8.5。 

所述产物分离纯化方法如下：转化液离心，上清液用乙酸乙酯萃取，于萃取液中得到所述(S)-1-(3，5-二三氟甲基)苯基乙醇。 

具体的，所述方法如下：