[发明专利]人体尿液中沙丁胺醇、雌二醇、双酚A和己烯雌酚的共检测方法

权利要求书

1.一种人体尿液中沙丁胺醇、雌二醇、双酚A和己烯雌酚的共检测方法，其特征在于包括以下步骤：

第一步，收集人体尿液10-20ml将收集的尿液离心后保存；

第二步，取第一步得到的尿液，加入内标萘羟心胺，再加入甲醇和盐酸进行酸解；

第三步，取第二步中的剩余液，加入氢氧化钠溶液和乙酸钠缓冲液，然后过cleanert PCX固相萃取柱，固相萃取条件为：用2ml甲醇和2ml 0.1M的HCl活化预处理；以8ml/min的流速过样品；用2ml 0.1M的HCl和2ml甲醇洗柱；用2ml体积比为80∶2∶2的氯仿/异丙醇/32％氨水的混合液洗脱，收集洗脱液为A液，上固相萃取柱的直接流出液待用；

第四步，取第三步中的样品上固相萃取柱的直接流出液，过cleanert PEP固相萃取柱，固相萃取条件为：用3ml MTBE、3ml甲醇和3ml纯水活化预处理；用3ml体积比为1∶1的甲醇/水的混合液洗涤；用6ml体积比为1∶9的甲醇∶MTBE的混合液洗脱，收集洗脱液为B液；

第五步，吹干A液，用乙腈复溶后加MSTFA衍生化；

第六步：吹干B液，加PFPA衍生化，加碳酸钾溶液后用石油醚萃取两次，合并有机相，经无水硫酸钠脱水吹干，最后用正己烷复溶；

第七步：取第五步和第六步中的反应液用于气相色谱质谱联用测定。

2.如权利要求1所述的人体尿液中沙丁胺醇、雌二醇、双酚A和己烯雌酚的共检测方法，其特征是所述第一步中尿液离心后保存的温度为-20℃。

3.如权利要求1所述的人体尿液中沙丁胺醇、雌二醇、双酚A和己烯雌酚的共检测方法，其特征是所述第二步中尿液的体积为5ml，萘羟心胺加入的量为200μl，浓度为10μg/ml，甲醇加入的量为1ml，盐酸加入的量为300μl，浓度为6M。

4.如权利要求1所述的人体尿液中沙丁胺醇、雌二醇、双酚A和己烯雌酚的共检测方法，其特征是所述第三步中氢氧化钠溶液加入的量为180μl，浓度为5M；所述乙酸钠缓冲液加入的量为600μl，pH为5.0。

5.如权利要求1所述的人体尿液中沙丁胺醇、雌二醇、双酚A和己烯雌酚的共检测方法，其特征是所述第五步中乙腈的用量为50μl；所述衍生化试剂为MSTFA，加入的量为50μl，衍生化温度为60℃，衍生化时间为30min。

6.如权利要求1所述的人体尿液中沙丁胺醇、雌二醇、双酚A和己烯雌酚的共检测方法，其特征是所述第六步中加入碳酸钾溶液的量为3mL，质量分数为1％；加入石油醚的量为2ml；加入正己烷的量为100ul。

7.如权利要求1所述的人体尿液中沙丁胺醇、雌二醇、双酚A和己烯雌酚的共检测方法，其特征是所述第七步中所取的反应液进样体积为1～5μl。

8.如权利要求1所述的人体尿液中沙丁胺醇、雌二醇、双酚A和己烯雌酚的共检测方法，其特征是所述第七步中用于气相色谱质谱联用测定的条件为：色谱柱选择中等极性或非极性色谱柱中的一种，采用EI源电离和SIM扫描模式，电离电压为70eV，离子源温度在220～250℃，进样口温度在260℃～290℃。