[发明专利]人体尿液中沙丁胺醇、雌二醇、双酚A和己烯雌酚的共检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，特别是涉及一种人体尿液中沙丁胺醇、雌 二醇、双酚A和己烯雌酚的共检测方法。

背景技术

雌二醇属于甾体同化激素，对体内糖、脂肪、蛋白质、盐等物质的代谢有不 同程度的影响，雌二醇常被用于畜牧业养殖中，用来提高动物体重和喂养效率。 雌二醇属于内源性(天然)激素，而双酚A和己烯雌酚是雌激素类似物。环境雌 激素属于环境内分泌干扰物，它的分子结构与雌激素相似，进入体内后无法分 辨，于是在体内就具有雌激素效应。外源性雌激素及其类似物进入动物或人体 后，能对机体内正常内分泌物质的合成、释放、运转、代谢以及结合等产生干扰， 从而破坏内分泌系统的调控作用。外源性雌激素及其类似物会增加癌症的患病 几率，特别是男性的睾丸癌、前列腺癌以及女性的乳腺癌、子宫颈癌。滥用激 素对人和动物健康、生态环境都会造成直接或潜在的危害。20世纪80年代以来， 欧盟等许多国家和组织通过立法限制或禁止在食用性动物饲养中使用激素。

沙丁胺醇为β-受体激动剂，临床上用于治疗支气管哮喘或喘息型支气管炎 伴有的支气管痉挛等病症。该药物除具有上述药理作用外，若大剂量使用还会 兴奋中枢神经系统，并会产生蛋白同化作用，所以被运动员用作刺激剂和蛋白 同化制剂[1]。沙丁胺醇作为β-肾上腺素受体兴奋剂，用于动物饲养可起促生 长作用，所以还常用于饲料添加剂中。

鉴于环境污染的形势非常严峻，建立环境污染对人体危害的预警体系非常 有必要。学术界对污染物质检测的研究非常多，但多集中在环境外暴露测量。 上个世纪末，学者研究通常是对环境样本(空气、土壤和水)中单个或多个污 染物质进行检测，是环境监理实施监督管理的耳目和手段，着重检测环境样品 中污染物质的含量以此间接评价其对人体健康的影响。这在环境卫生学中属于 环境外暴露剂量研究。近十年，对人体内某些污染物质的检测逐渐增多，涉及 的物质越来越广泛，包括芳香族化合物、农药、兽药、食品添加剂和环境激素 等。这在环境卫生学中属于环境内暴露剂量研究。对于环境外暴露的检测，由 于每个人接触到的环境污染物质种类、污染水平和污染程度是不同的，另外人 体对这些污染物质的敏感程度也不一样，环境污染对人体伤害的潜伏期又较长， 很难从直觉来感知其污染的程度，所以往往出现“身在毒中不知毒”的情况。 而环境内暴露检测通常是对大量人群体内某种或某一类污染物质的分布进行测 定，能够避免个体差异的影响，真实客观地反映人体污染物质的暴露水平。作 为内暴露的检测样本主要有血样，组织样本和尿样。而尿样作为内暴露的检测 样本，对人体无损伤，取样方便，易获得。可用于临床上大规模的体检排查。

目前环境雌激素的测定方法文献报道多为气相色谱/质谱法(GC/MS)和液 相色谱/质谱法(LC/MS)。沙丁胺醇常用的检测方法主要是以酶联免疫法(ELISA) 为主，也有用高效液相色谱法测定的报道，但主要用于饲料样品的检测。GC/ MS法是国际公认的确证方法，同时检测灵敏度高，能定性定量，为检测低浓度 代谢物提供条件，并且其自动化检测更容易进行大批量的测定。方法方便，快 捷，准确。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种方法简便、快捷、结果可靠、自动 化程度高、便于产业化应用的人体尿液中沙丁胺醇、雌二醇、双酚A和己烯雌 酚的共检测方法。

本发明方法是通过以下技术方案实现的，其特征在于包括以下步骤：

第一步，将收集的尿液离心后保存；

第二步，取第一步得到的尿液，加入内标萘羟心胺，再加入甲醇和盐酸进 行酸解；

第三步，取第二步中的剩余液，加入氢氧化钠溶液和乙酸钠缓冲液，然后 过cleanert PCX固相萃取柱，收集洗脱液为A液，剩余液待用；

第四步，取第三步中的样品剩余液，过cleanert PEP固相萃取柱，收集洗 脱液为B液；

第五步，吹干A液，用乙腈复溶后衍生化；

第六步：吹干B液，加碳酸钾溶液后用石油醚萃取两次，合并有机相，经 无水硫酸钠脱水吹干，最后用正己烷复溶；

第七步：取第五步和第六步中的反应液用于气相色谱质谱联用测定。

本发明具有以下优点：

1.本发明采用尿样作为检测样本，对人体无损伤，方便且易获得。