[发明专利]羟基磷灰石/丝素蛋白复合多孔支架材料的制备方法

权利要求书

1.一种羟基磷灰石/丝素蛋白复合多孔支架材料的制备方法，其特征在 于包括以下步骤：

(1)将脱胶后的纤维状丝素在重量百分比浓度为50％的CaCl₂溶液中， 重量比为1∶25，温度98℃，时间5min，溶解后经过滤、透析后获得重量浓 度为5％丝素蛋白溶液；

(2)将60℃的饱和Ca(OH)₂溶液置于60℃水浴中，缓慢滴加10％wt 的H₃PO₄溶液，滴加过程中快速搅拌，溶液的pH保持在8.7；搅拌3h后置 于25℃静置48h，将沉淀离心，将离心所得沉淀物于超声波清洗器中振荡处 理30min，得到羟基磷灰石匀浆；

(3)在不断搅拌并保持水温为25℃条件下，根据配比需要，将丝素蛋 白溶液滴加于羟基磷灰石匀浆中，将混合溶液放入超声波清洗器中，振荡处 理3～5min后取出，向其中缓慢滴加终浓度为0.03％的戊二醛交联剂并搅拌 均匀后，快速移入24孔细胞培养平板，并立即放入-20℃冰箱预冷冻12h；

(4)将冷冻12h后的载样细胞培养平板取出，在25℃条件下，回温处 理10～30min，然后重新放入-20℃冰箱再冷冻24h，然后再次取出放入-50 ℃冷冻干燥机中干燥，最终制得各种不同比例的羟基磷灰石/丝素蛋白复合多 孔支架材料。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)饱和 Ca(OH)₂溶液和10％wt的H₃PO₄溶液的配比为体积比700∶11。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)用氨 水调节pH值，使pH保持在8.7。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)的滴 加过程中使用磁力搅拌器快速搅拌。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)的沉 淀离心的离心速率为4000r/min。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)得到 的羟基磷灰石匀浆的钙磷比为1.67。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(4)的羟 基磷灰石/丝素蛋白复合多孔支架材料的比例为1∶9～7∶3。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的脱胶后的纤维 状丝素的脱胶方法，包括以下步骤：

(1)将桑蚕茧去蛹后的茧层剪成1cm²的茧片，放入重量百分比浓度为 0.5％Na₂CO₃沸水中进行脱胶处理，桑蚕茧层与Na₂CO₃溶液的质量比为1∶ 30；

(2)30min后，将已成纤维状的蚕茧捞出拧干，并用去离子水清洗多次， 重复上述操作2次，室温下自然晾干后得纤维状脱胶蚕丝，即脱胶后的纤维 状丝素。

9.权利要求1至6中任一权利要求的方法制得的羟基磷灰石/丝素蛋白 复合多孔支架材料应用于骨组织工程支架材料。