[发明专利]用于生产无抗原豆粕的微生物菌剂及其制备方法

权利要求书

1、用于生产无抗原豆粕的微生物菌剂，其特征在于该菌剂可以以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株WB117，酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae Meyenex Hansen)菌株WY238及乳杆菌(Lactobacillus sp.)菌株L1为菌种，经接种培养基、发酵、培养，分别制备成菌数在1亿cfu/g以上，含水率在8～14％之间的单菌种菌剂，再将三单菌种菌剂按重量1～3:1 ～3:1～3比例混配成生产用复合菌剂而获得。

2、制备权利要求1所述用于生产无抗原豆粕微生物菌剂的方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：

(1)枯草芽孢杆菌菌株WB117菌剂的制备：1)、将斜面保存的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株WB117菌种接种至LB液体培养基中，在30～37℃，转速120～220rpm下进行液体摇瓶发酵培养16～24h后成为液体菌种，备用；2)、将麸皮、膨润土、砻糠、葡萄糖和K₂HPO₄按重量70-80％：∶5-20％：∶5-20％∶1-5％∶1-3％比例混合后，按料、水重量1∶1比例加水，经0.01MPa灭菌30min成固体培养基，备用；3)、将1)液体菌种按1～3％的接种量接入2)的固体培养基内拌匀，经30-37℃，60-72小时培养成固体母种；4)、将3)固体母种按0.5～2％的接种量接入2)的固体培养基中，控制料温在28～50℃之间，以通气曲盘、曲池或固体发酵罐方式，经60-72小时的工厂化培养；5)、出料后在40～50℃下干燥，粉碎，过60目筛，经检测菌数在1亿cfu/g以上，含水率在8～14％之间即成菌株WB117菌剂；

(2)酿酒酵母菌株WY238菌剂的制备：1)、将斜面保存的酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae Meyen ex Hansen)菌株WY238菌种接种至马铃薯液体培养基中，在25～30℃，转速120～220rpm下进行液体摇瓶发酵培养16～24h后成为液体菌种，备用；2)、将麸皮、菜饼、砻糠、豆饼粉、葡萄糖和K₂HPO₄按重量75～85％∶5～10％∶3～8％∶2～6％∶0.3-1％∶0.2-0.3％比例混合后，按料、水重量1：1比例加水，经0.01MPa灭菌30min后成固体培养基，备用；3)、将1)液体菌种按1～3％的接种量接入2)的固体培养基内拌匀，经25-30℃，16-24小时培养成固体母种；4)、将3)固体母种按0.5～2％接种量接入2)固体培养基中，控制料温在28～38℃之间，以通气曲盘、曲池或固体发酵罐方式，经16-24小时工厂化发酵培养；5)、出料后在40～50℃下干燥，粉碎，过60目筛，经检测菌数在1亿cfu/g以上，含水率在8～14％之间即成菌株WY238菌剂；

(3)乳酸菌菌株L1菌剂的制备：1)、将保存的乳杆菌(Lactobacillus sp.)菌株L1菌种接种至麸皮汁液体培养基中，33℃～38℃下，静置培养16～24小时成液体菌种，备用；2)、将糖蜜10～15％、酵母膏0.5～1％、蛋白胨0.3～0.8％及葡萄糖或蔗糖0.1～0.3％，并以水补足至100％，混合后置液体发酵罐内，经0.01MPa灭菌30min成液体培养基，备用；3)、将1)液体菌种按5～10％接种量接入2)液体培养基中，在33～38℃，厌氧条件下发酵培养18-30小时后，取出；4)、将3)发酵液与麸皮按体积重量1升：1公斤比例混匀、吸附后，在40～45℃下通风、干燥，粉碎，过60目筛，经检测菌数在1亿cfu/g以上，含水率在8～14％之间即成菌株L1菌剂；

(4)复合菌剂的制备：将步骤(1)、(2)与(3)三种单种菌剂按重量份1～3∶1～3∶1～3比例混合即成复合菌剂。