[发明专利]CD19单克隆抗体免疫脂质体的制备及用途

说明书

技术领域

本发明属生物技术，主要涉及CD19单克隆抗体(单抗)-4-2E8修饰并载 有杀灭B系白血病干细胞的去甲斑蝥素(NCTD)免疫脂质体的制备及用途。

背景技术

B淋巴细胞白血病/淋巴瘤是常见的血液恶性肿瘤，约在占每年肿瘤新发病 例的4％-5％。虽然患B淋巴细胞白血病的病人对初始化疗反应较好，然而大 部分病例容易复发，特别是成人病例更易复发，主要原因是病人体内残留的恶 性B细胞或肿瘤干细胞未完全清除。此外，常规化疗药对肿瘤细胞无特异杀伤 效应；对正常组织也产生毒副作用。因此，寻找能完全根除残留的恶性B淋巴 细胞或B淋巴细胞白血病干细胞，同时能减轻对正常组织不良反应的治疗方 法，对彻底根治B淋巴细胞白血病具有重要意义。

近年来，以抗体为基础的靶向治疗(包括免疫毒素、放射免疫疗法和免疫 脂质体)，能特异地靶向肿瘤细胞并大大降低化疗药物的毒副作用；与常规化 疗药物相比，能显著提高抗肿瘤疗效。其中，免疫脂质体是靶向治疗快速发展 的分支，也是先进药物传输体统的主流之一；具有生物治疗(抗体)和药物传输 系统(脂质体)的双重优势，被认为是肿瘤治疗最有前途的方法之一。

CD19在B淋巴细胞白血病干细胞表面表达。研究报道：从B淋巴细胞白 血病患者骨髓中分离出的CD34+CD38-CD19+移植给SCID小鼠，能发展成为 B淋巴细胞白血病。从被移植的SCID小鼠的骨髓中再次分离出 CD34+CD38-CD19+细胞，又移植给另一只SCID小鼠，也能发展成为B淋巴 细胞白血病，证明CD34+CD38-CD19+细胞是具有自我更新能力的B淋巴细胞 白血病干细胞。CD34+CD10-CD38-CD19-细胞移植给SCID小鼠则不能发展成 为B淋巴细胞白血病；证明CD34+CD10-CD38-CD19-细胞为正常造血干细胞。 此外，CD19在分化的恶性B淋巴细胞表面也高表达，其与CD19抗体结合后 可介导CD19抗体的内化。因此，CD19是免疫脂质体获得靶向杀伤B淋巴细 胞白血病干细胞及子代细胞的一个理想的靶点。虽然正常的B淋巴细胞表面 也表达CD19，免疫脂质体在治疗过程中有可能杀死正常的B细胞，但骨髓造 血干细胞表面不表达CD19，因此骨髓造血干细胞仍可源源不断地长出正常B 淋巴细胞。研究报道：与抗人CD19单抗连接制备的阿霉素、伊马替尼、长春 新碱等免疫脂质体，能显著提高对CD19高表达的肿瘤细胞特异性地结合和靶 向杀伤效应，体内能显著延长B淋巴细胞白血病模型小鼠的生存时间。但它们 均不能杀灭白血病干细胞，限制了它们用于治愈B系白血病的作用。

去甲斑蝥素(norcantharidine，NCTD)是中药抗癌活性成分斑蝥素 (cantharidin，CA)去除两个甲基的衍生物，也是磷酸酯酶A₂的抑制剂。NCTD 对许多肿瘤细胞株有抑制作用，其作用机制与阻滞细胞周期的各个时相和诱导 肿瘤细胞凋亡相关。最近又证实NCTD可特异性地诱导白血病干细胞(leukemic stem cells，LSCs)凋亡，其机制与特异性调节LSCs相关的抗凋亡路径(HLF， hepatic leukemia factor/SLUG轴)密切相关。HLF是LSC中稳定表达的基因之 一，作为转录因子在白血病细胞转化中参与HLF/SLUG轴的抗凋亡的活性。 NCTD特异性地下调HLF基因的转录，上调NFIL-3(nuclear factor，IL3 regulated) 基因的转录，因此减弱了LSCs相关的HLF/SLUG轴的抗凋亡活性，从而诱 导LSCs凋亡。而普通抗白血病药物(如：阿糖胞苷、柔红霉素)主要作用于成 熟的分化型白血病细胞，对处于静止期LSCs无特异性的杀伤作用。此外，由 于多耐药相关基因与LSCs密切相关，而NCTD能主动逆转耐药机制，抑制多 耐药相关基因ABCA3和ABCC4表达。可见NCTD对LSCs和成熟的分化型白 血病细胞均具有杀伤效应。然而，NCTD也通过HLF/SLUG轴诱导正常造血 干细胞(hematopoietic stem cells，HSCs)的凋亡；并容易引起消化系统和泌尿系 统的毒副作用；这在一定程度上削弱了NCTD对LSCs及其子细胞的治疗优势。 若能通过靶向药物传输系统，将NCTD特异性靶向LSCs及其子代细胞，而对 HSCs和其它正常组织不产生杀伤作用，这将为彻底根治白血病，防止其复发 提供有效的治疗方法。

发明内容