[发明专利]从非变性聚丙烯酰胺胶中回收和纯化DNA片段的方法有效
申请号: | 200910100944.5 | 申请日: | 2009-08-10 |
公开(公告)号: | CN101619311A | 公开(公告)日: | 2010-01-06 |
发明(设计)人: | 朱玉君;庄杰云;樊叶杨 | 申请(专利权)人: | 中国水稻研究所 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10;C07H21/04 |
代理公司: | 浙江翔隆专利事务所 | 代理人: | 沈绿怡 |
地址: | 310006浙*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 变性 聚丙烯酰胺 回收 纯化 dna 片段 方法 | ||
1.一种从非变性聚丙烯酰胺胶中回收和纯化DNA片段的方法,该方法具体 步骤如下:
(1)样品清洗:从染色显带后的非变性PAGE胶中切下目标DNA片段,置于 称量皿中,加入双蒸水洗涤;
(2)样品研磨:将洗涤后的胶条移入无菌离心管,利用组织研磨仪将其充 分打碎;
(3)样品浸泡:加入分散缓冲液,所述分散缓冲液为:0.5M醋酸铵,0.01M 醋酸镁,pH8.0的1mM EDTA,0.1%SDS,混匀,60℃温浴1小时;
(4)凝胶去除:加入与上述分散缓冲液等体积的氯仿抽提液,离心,吸取 上清液,移入新的无菌离心管中;
(5)乙醇沉淀:加入上述上清液2倍体积的冰乙醇,混匀,静置10分钟, 离心,弃上清液,经75%乙醇清洗后,倒置干燥;
(6)DNA溶解:加入1×TE缓冲液,溶解,取微量样品检测其质量,其余样品保 存于-20℃待用。
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