[发明专利]从非变性聚丙烯酰胺胶中回收和纯化DNA片段的方法有效

专利信息
申请号: 200910100944.5 申请日: 2009-08-10
公开(公告)号: CN101619311A 公开(公告)日: 2010-01-06
发明(设计)人: 朱玉君;庄杰云;樊叶杨 申请(专利权)人: 中国水稻研究所
主分类号: C12N15/10 分类号: C12N15/10;C07H21/04
代理公司: 浙江翔隆专利事务所 代理人: 沈绿怡
地址: 310006浙*** 国省代码: 浙江;33
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摘要:
搜索关键词: 变性 聚丙烯酰胺 回收 纯化 dna 片段 方法
【权利要求书】:

1.一种从非变性聚丙烯酰胺胶中回收和纯化DNA片段的方法,该方法具体 步骤如下:

(1)样品清洗:从染色显带后的非变性PAGE胶中切下目标DNA片段,置于 称量皿中,加入双蒸水洗涤;

(2)样品研磨:将洗涤后的胶条移入无菌离心管,利用组织研磨仪将其充 分打碎;

(3)样品浸泡:加入分散缓冲液,所述分散缓冲液为:0.5M醋酸铵,0.01M 醋酸镁,pH8.0的1mM EDTA,0.1%SDS,混匀,60℃温浴1小时;

(4)凝胶去除:加入与上述分散缓冲液等体积的氯仿抽提液,离心,吸取 上清液,移入新的无菌离心管中;

(5)乙醇沉淀:加入上述上清液2倍体积的冰乙醇,混匀,静置10分钟, 离心,弃上清液,经75%乙醇清洗后,倒置干燥;

(6)DNA溶解:加入1×TE缓冲液,溶解,取微量样品检测其质量,其余样品保 存于-20℃待用。

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