[发明专利]采用微不定芽技术快速繁殖转基因半夏的方法

权利要求书

1.一种采用微不定芽技术快速繁殖转基因半夏的方法，其特征在于，将转基因半夏外 植体经过消毒后，置于生芽培养基上，光照培养，生成叶片和叶柄；待顶芽长到4cm-6cm 时，切下叶片和叶柄，置于微不定芽诱导培养基上，光照培养，在所述叶片和叶柄周围长 出大量微不定芽；待所述微不定芽长到3cm-4cm高时，将所述微不定芽转移到不定芽生根 培养基上，使生成不定根；将生长健壮的完整植株再移栽到盛有移栽基质的盆中，通过驯 化获得生长正常的转基因半夏植株；

所述外植体为含有顶芽的地下块茎；

所述生芽培养基为在MS培养基中添加1.0mg/L 6-苄基腺嘌呤、1.0mg/L萘乙酸、 30g/L蔗糖和8.5g/L琼脂粉；

所述微不定芽诱导培养基为在MS培养基中添加2.0mg/L 6-苄基腺嘌呤、30g/L蔗糖 和8.5g/L琼脂粉、若从叶片诱导微不定芽要添加0.1mg/L萘乙酸，若从叶柄诱导微不定芽 要添加0.25mg/L萘乙酸；

所述不定芽生根培养基为在1/2MS培养基中添加激动素1.0mg/L、萘乙酸2.0mg/L、 30g/L蔗糖和8.5g/L琼脂粉。

2.根据权利要求1所述采用微不定芽技术快速繁殖转基因半夏的方法，其特征是，所 述转基因半夏外植体的消毒，是指：从转基因半夏植株上剥取外植体，用酒精消毒，无菌 水清洗，再HgCl₂消毒，无菌水清洗。

3.根据权利要求2所述采用微不定芽技术快速繁殖转基因半夏的方法，其特征是，先 用体积浓度75％酒精消毒10分钟，无菌水清洗3遍，再用质量浓度0.1％HgCl₂消毒20 分钟，无菌水清洗8遍。

4.根据权利要求1或2所述采用微不定芽技术快速繁殖转基因半夏的方法，其特征是， 所述含有顶芽的地下块茎切去表皮部分，切成体积为3cm³-6cm³的小块。

5.根据权利要求1或2所述采用微不定芽技术快速繁殖转基因半夏的方法，其特征是， 所述待顶芽长到4cm-6cm时，切下叶片和叶柄是指切下幼嫩叶片和叶柄，叶柄长1cm-2cm、 叶片面积为2cm²-4cm²。

6.根据权利要求1或2所述采用微不定芽技术快速繁殖转基因半夏的方法，其特征是， 所述经光照培养，生成叶片和叶柄，是指：培养温度为25℃±1℃，每天光照16小时，10 天后外植体长出4cm-6cm的顶芽。

7.根据权利要求1或2所述采用微不定芽技术快速繁殖转基因半夏的方法，其特征是， 所述经光照培养，在叶片和叶柄周围长出大量微不定芽，是指：培养温度为25℃±1℃， 每天光照16小时，每14天-20天继代培养一次，经过1次继代培养后在叶片和叶柄周围 长出大量微不定芽。

8.根据权利要求1或2所述采用微不定芽技术快速繁殖转基因半夏的方法，其特征是， 所述使生成不定根是指：培养温度为25℃±1℃，每天光照16小时，经过20天使不定芽 生根，从而形成完整的半夏植株。

9.根据权利要求1或2所述采用微不定芽技术快速繁殖转基因半夏的方法，其特征是， 所述移栽基质为蛭石和泥土，两者的体积比为1∶2。