[发明专利]一种用于检测大豆间座壳/拟茎点综合症的试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种用于检测大豆间座壳/拟茎点综合症的试剂盒，其特征在于， 包括：含Buffer，Mgcl₂，dNTP，Taq酶的实时荧光反应混合液TaqMan  Universal PCR Master Mix、引物和探针；所述引物包括：

DP1F序列为5′-AGCCAGGCTTGAGGGTTGA-3′的大豆间座壳/拟茎 点综合症通用上游引物，以及

DP1R序列为5′-GAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTG-3′的大豆间座 壳/拟茎点综合症通用下游引物；

所述探针包括：

DP1P序列为5′-FAM-ACATTGCGCCCTCTGGTATTCCGG-TAMAR-3′的 大豆间座壳/拟茎点综合症通用探针。

2.如权利要求1所述的用于检测大豆间座壳/拟茎点综合症的试剂盒， 其特征在于，其组分为：所述含Buffer，Mgcl₂，dNTP，Taq酶的实时荧光反 应混合液TaqMan Universal PCR Master Mix每10μL，所述引物0.9μM，所 述探针0.2μM。

3.采用如权利要求1或2所述的用于检测大豆间座壳/拟茎点综合症 的试剂盒的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

A、在待测物中加入大豆拟茎点种腐病菌特异性引物、探针，或大豆 南方茎溃疡病菌特异性引物、探针，或大豆北方茎溃疡病菌特异性引物、 探针；

其中，所述大豆拟茎点种腐病菌特异性引物、探针中所述引物包括： A6PL1F序列为5′-GAGCGTCATTTCAACCCTCAA-3′的大豆拟茎点种 腐病菌上游引物，以及，A6PL1R序列为5′ -GGCCTTCCAGAGCGAGATATG-3′的大豆拟茎点种腐病菌下游引物，所 述探针包括：A6PL1M序列为5′-FAM-TTCGTCCAGAAAGC-MGB-3′ 的大豆拟茎点种腐病菌探针；

所述大豆南方茎溃疡病菌特异性引物、探针中所述引物包括：DM1F 序列为5′-AGGCGCACCCAGAAACC-3′的大豆南方茎溃疡病菌上游引物， 以及，DM1R序列为5′-TTTTGCTCAGAGTTTCGGTGTAAA-3′的大豆南方 茎溃疡病菌下游引物，所述探针包括：DM1M序列为 5′-FAM-TGAACTCATACCTTACTGTTG-MGB-3′的大豆南方茎溃疡病菌探 针；

所述大豆北方茎溃疡病菌特异性引物、探针中所述引物包括：DC2F 序列为5′-AGAACCAAGAGATCCGTTGTTGAA-3′的大豆北方茎溃疡病菌 上游引物，以及，DC2R序列为5′-CCGGCGGCCAAGCTA-3′的大豆北方茎 溃疡病菌下游引物，所述探针包括：DC2M序列为5’- FAM-CATTTATGTTTATTTCTCAGAGTTT-MGB-3’的大豆北方茎溃疡病菌 探针；

B、扩增步骤；

质控步骤：在待测物中加入如权利要求1中所述引物、探针，进行所 述步骤B；以及，

判定步骤。

4.如权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述扩增步骤包括如 下步骤：

50℃持续2分钟；

95℃持续10分钟；

D、95℃持续15秒；

63℃持续1分钟，然后进行所述步骤D，直到所述步骤D进行了40 个循环为止。