[发明专利]检测美澳型核果褐腐病菌的引物、探针、试剂盒及方法

权利要求书

1.一条引物，其序列为SEQ ID NO：1：

5’-CCTTCGGGCCTTGTATGCT-3’。

2.一条引物，其序列为SEQ ID NO：2：

5’-CCAAGAGATCCGTTGTTGAAAGT-3’。

3.一对引物，其序列为：

SZMfc-F：5’-CCTTCGGGCCTTGTATGCT-3’  SEQ ID NO：1

SZMfc-R：5’-CCAAGAGATCCGTTGTTGAAAGT-3’   SEQ ID NO：2。

4.一条寡核苷酸探针，其序列为SEQ ID NO：3：

5’-FAM-CCAGAGGATAATTAAAC-MGB-3’。

5.一对引物和一条寡核苷酸探针，所述一对引物的序列为：

SZMfc-F：5’-CCTTCGGGCCTTGTATGCT-3’   SEQ ID NO：1

SZMfc-R：5’-CCAAGAGATCCGTTGTTGAAAGT-3’   SEQ ID NO：2，

所述一条寡核苷酸探针的序列为：

SZMfc-Pb：5’-FAM-CCAGAGGATAATTAAAC-MGB-3’SEQ IDNO：3。

6.用于美澳型核果褐腐病菌检测的一对引物和一条寡核苷酸探针。

7.根据权利要求6的用于美澳型核果褐腐病菌检测的一对引物和一条寡核苷酸探针，所述引物序列为：

SZMfc-F：5’-CCTTCGGGCCTTGTATGCT-3’   SEQ ID NO：1

SZMfc-R：5’-CCAAGAGATCCGTTGTTGAAAGT-3’   SEQ ID NO：2。

8.根据权利要求6的用于美澳型核果褐腐病菌检测的一对引物和一条寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针序列为：

SZMfc-Pb：5’-FAM-CCAGAGGATAATTAAAC-MGB-3’SEQ IDNO：3。

9.一种用于美澳型核果褐腐病菌实时荧光PCR检测的试剂盒，所述试剂盒包含一对引物和一条寡核苷酸探针，所述一对引物的序列为：

SZMfc-F：5’-CCTTCGGGCCTTGTATGCT-3’   SEQ ID NO：1

SZMfc-R：5’-CCAAGAGATCCGTTGTTGAAAGT-3’   SEQ ID NO：2，

所述一条寡核苷酸探针的序列为：

SZMfc-Pb：5’-FAM-CCAGAGGATAATTAAAC-MGB-3’SEQ IDNO：3。

10.一种大豆真菌病害实时荧光PCR检测方法，包括如下步骤：

(1)先对美澳型核果褐腐病菌、核果褐腐病菌和欧洲种仁果褐腐病菌内转录间隔区进行序列测定及比较分析，分别找出美澳型核果褐腐病菌不同于其它近似种的独有的碱基位点；

(2)设计美澳型核果褐腐病菌实时荧光PCR检测的引物和寡核苷酸探针，所述一对引物的序列为：

SZMfc-F：5’-CCTTCGGGCCTTGTATGCT-3’   SEQ ID NO：1

SZMfc-R：5’-CCAAGAGATCCGTTGTTGAAAGT-3’   SEQ ID NO：2，

所述一条寡核苷酸探针的序列为：

SZMfc-Pb：5’-FAM-CCAGAGGATAATTAAAC-MGB-3’SEQ IDNO：3；

(3)加入上述的引物、探针进行美澳型核果褐腐病菌实时荧光PCR反应。