[发明专利]分支杆菌培养基及制备方法及培养、鉴定和药敏测定方法

权利要求书

1.一种分支杆菌培养、鉴定和药敏培养基，其特征在于由如下组分组成：

KH₂PO₄        1.5g，        Na₂HPO₄        1.5g，

枸椽酸钠      0.4g，        硫酸铵         0.5g，

MgSO₄         0.05g，       谷氨酸钠       0.5g，

生物素        0.5g，        枸椽酸铁铵     0.04g，

氯化钙        0.05g，       盐酸吡哆醇     0.01g，

ZnSO₄         0.01g，       泛酸钙         0.01g，

CuSO₄         0.01g，       丙三醇         5ml，

变色剂噻唑兰10-30mg，白蛋白-油酸-葡萄糖液  100-200ml，

两性霉素    5-10mg，     柰啶酸        5-10mg，

氨苄青霉素  25-50mg，    甲氧苄嘧啶    5-10mg，

蒸馏水      定容至1000ml。

2.一种权利要求1所述的分支杆菌培养、鉴定和药敏培养基的制备方法，其特征在于包括如下步骤：按配方取KH₂PO₄、Na₂HPO₄、枸椽酸钠、硫酸铵、MgSO₄、谷氨酸钠、生物素、枸椽酸铁铵、氯化钙、盐酸吡哆醇、ZnSO₄、泛酸钙、CuSO₄、丙三醇加入蒸馏水中，混匀后采用6N HCl调pH至6.6～6.8，经高压灭菌15分钟，待冷至50～60℃加入无菌的变色剂噻唑兰、白蛋白-油酸-葡萄糖液和四种抗生素，然后分装，避光保存。

3.一种同时进行分支杆菌培养、鉴定和药敏测定的方法，其特征在于包括如下步骤：取前处理过的标本加入权利要求1所述的培养基中，混匀，再加入培养板中的培养孔、鉴定孔和药敏测定孔中，盖上板盖，35-37℃培养，接种后从第2天开始，每天观察培养板各孔变色情况，待培养孔变色后，取培养孔培养液进行抗酸染色，如见抗酸杆菌则报告培养出分支杆菌，此时根据鉴定孔的变色情况判断是结核分支杆菌还是非结核分支杆菌，根据药敏测定孔的变色情况判断药物敏感性。

4.根据权利要求3所述的同时进行分支杆菌培养、鉴定和药敏测定的方法，其特征在于：所述鉴定孔内的鉴定试剂采用对硝基苯甲酸，浓度为0.2-0.5毫克/毫升。

5.根据权利要求3或4所述的同时进行分支杆菌培养、鉴定和药敏测定的方法，其特征在于：所述标本的前处理采用N-乙酰-L-半胱氨酸-NaOH法。

6.根据权利要求3或4所述的同时进行分支杆菌培养、鉴定和药敏测定的方法，其特征在于：所述标本的前处理是先采用2％～4％重量百分含量NaOH或H₂SO₄处理方法，再将沉淀混悬于0.067mol/L PB缓冲液20ml中，混匀后离心15分钟，去上清液，最后将沉淀混悬于灭菌的0.067mol/L PB缓冲液1～2ml，备接种用。