[发明专利]分支杆菌培养基及制备方法及培养、鉴定和药敏测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种分支杆菌培养、鉴定和药敏培养基及其制备方法，以及同时进行分支杆菌培养、鉴定和药敏测定的方法。

背景技术

分支杆菌(也称“分枝杆菌”)种类多达100余种，广泛分布于自然界，多为腐生菌，少数为人类和动物致病菌。国内外报道，分支(枝)杆菌感染日益增多，结核分支(枝)杆菌感染疫情和耐药情况相当严重，非结核分支(枝)杆菌感染的发生率也呈逐年上升趋势。而涂片染色检查分支(枝)杆菌需标本中含10⁴/ml条分支(枝)杆菌方能检出，敏感性低，鉴别结核和非结核分支(枝)杆菌特异性差。因此，分支(枝)杆菌培养、鉴定在诊断分支(枝)杆菌感染过程中起着决定性作用。

目前，分支(枝)杆菌培养基种类主要有固体培养基和液体培养基，固体培养基有改良罗-琼(Lowenstein-Jensen，J-L)培养基、酸性L-J培养基、丙酮酸钠培养基和Middlebrook系列固体培养基等。液体培养基有变色液体培养基，Middlebrook7液体培养基等，如放射性检测系统(Bactec460系统)、荧光感应器检测系统(Bactec960系统)和CO₂感应检测系统(MB/Bact系统)。它们仅适用于临床上分离培养分支(枝)杆菌，待培养出分支(枝)杆菌后，再分别进行结核分支(枝)杆菌和非结核分支(枝)杆菌鉴定及药物敏感性试验，其所需时间长，培养阳性后再进行结核分支(枝)杆菌和非结核分支(枝)杆菌的鉴定和药敏，一般要3～6个月才能出结果。由于现有常用分支(枝)杆菌鉴定方法实用性差，导致绝大多数实验室不进行结核分支(枝)杆菌和非结核分支(枝)杆菌鉴定。传统生化反应鉴定和药物敏感性试验操作烦琐、费时，需4～8周时间，影响因素多，如菌量、菌龄，尤其是菌量控制无客观标准，重复性差。因此，急需快速、简便、准确同时进行分支(枝)杆菌培养、鉴定和药敏测定方法。

发明内容

本发明的目的在于克服现有分支杆菌培养、鉴定和药物敏感性试验须分步进行的不足，提供一种分支杆菌培养、鉴定和药敏培养基，及该培养基的制备方法，及使用该培养基同时进行分支杆菌培养、鉴定和药敏测定的方法。

本发明的分支杆菌培养、鉴定和药敏培养基，由如下组分组成：

KH₂PO₄        1.5g，         Na₂HPO₄       1.5g，

枸椽酸钠     0.4g，         硫酸铵        0.5g，

MgSO₄        0.05g，        谷氨酸钠      0.5g，

生物素       0.5g，         枸椽酸铁铵    0.04g，

氯化钙       0.05g，        盐酸吡哆醇    0.01g，

ZnSO₄        0.01g，        泛酸钙        0.01g，

CuSO₄       0.01g，      丙三醇              5ml，

变色剂噻唑兰10-30mg，    白蛋白-油酸-葡萄糖液100-200ml，

两性霉素    5-10mg，     柰啶酸              5-10mg，

氨苄青霉素  25-50mg，    甲氧苄嘧啶          5-10mg，

蒸馏水      定容至1000ml。

本发明的分支杆菌培养、鉴定和药敏培养基的制备方法，包括如下步骤：按配方取KH₂PO₄、Na₂HPO₄、枸椽酸钠、硫酸铵、MgSO₄、谷氨酸钠、生物素、枸椽酸铁铵、氯化钙、盐酸吡哆醇、ZnSO₄、泛酸钙、CuSO₄、丙三醇加入蒸馏水中，混匀后采用6N HCl调pH至6.6～6.8，经高压灭菌15分钟，待冷至50～60℃加入无菌的变色剂噻唑兰、白蛋白-油酸-葡萄糖液和四种抗生素(即两性霉素、柰啶酸、氨苄青霉素、甲氧苄嘧啶)，然后分装，避光保存。