[发明专利]网织红细胞模拟物及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及血液质控物。更具体地讲，本发明涉及网织红细胞模拟物的制备方法，由所述方法得到的网织红细胞模拟物，以及包含所述网织红细胞模拟物的全血质控物。

背景技术

血液质控物是一种含有单一或多组分血细胞或血细胞模拟物的液体，具备如同血液一样的可检测特性，用于日常监控血液分析仪的准确性和精确性。

网织红细胞相关参数是中、高端血细胞分析仪所提供的一项重要信息。网织红细胞是刚脱去核尚残留有少量RNA的未完全成熟的红细胞。网织红细胞的总数或百分比对贫血的临床诊断及疗效观察非常有价值。是血液学诊断常做的项目之一。使用质控物对网织红细胞的计数进行质量控制则是保证血细胞分析仪给出网织红细胞准确计数信息的前提。

美国专利5736402、5858789、5945340、6444471公开了一种包含网织红细胞模拟物的质控物制备方法，通过离心沉降等方式富集并纯化猪血液中的网织红细胞，采取成熟停止(maturation-arrest)的方法对网织红细胞进行保护，然后用特定的保存液对网织红细胞进行保存。但是，由于猪血液中网织红细胞所占比例较低，使得采用该方法的原料处理量很大；另外，由于白细胞与网织红细胞具有近似的沉降性质，所以两者很难通过离心等常规手段分离，如果使用白细胞过滤器，由于网织红细胞在细胞中的比例低，就要用到大量白细胞过滤器，这会大大增加制备成本；再者，猪网织红细胞体积明显小于人网织红细胞，仿真性不高。

美国专利7195919提出了一种模拟网织红细胞质控物的方法，该方法主要是通过核酸、肽核酸或粘多糖等生物高聚物与哺乳动物红细胞表面相连接，从而使所连接的高聚物结合染料，模拟网织红细胞的仪器检测形态。由于该方法的原理是在细胞表面连接核酸，连接强度(特别是在长期的储存期中)难以保证；并且需要对核酸进行活化，及对活化试剂进行去除，操作步骤繁琐不可控。

美国专利6399388、6406915、5432089通过渗透压的变化使红细胞的胞膜膨胀，产生小孔，然后将RNA等核酸物质或者所谓聚阴离子注入胞内，从而模拟网织红细胞的形态。其存在的问题是，由于有效注入核酸的细胞比例不高，导致网织红细胞产率低，制备产物为红细胞与类网织红细胞的混合物，且由于细胞经过了涨缩打孔，其膜强度降低，另外操作步骤繁琐，使得此方案难以用于质控物产品的生产。

因此，本领域存在通过采用简单、经济的方法获得网织红细胞模拟物的需要。

发明内容

本发明一方面提供了一种制备网织红细胞模拟物的方法，所述方法包含以下步骤：

洗涤与分离抗凝含无核红细胞的血液，得到纯化的无核红细胞；

加入细胞处理液和固定剂，所述细胞处理液中含有蛋白质变性剂以及任选的渗入性试剂和/或表面活性剂，对所述无核红细胞表面和/或胞内的物质进行处理和固定；

对所得的产物进行洗涤。

本发明另一方面提供了一种网织红细胞模拟物，所述网织红细胞模拟物通过上述方法制备得到。

本发明还一方面提供了一种全血质控物，所述全血质控物包含本发明所提供的网织红细胞模拟物。

再一方面涉及一种用于制备网织红细胞模拟物的组合物，所述组合物包含细胞处理液和固定剂，所述细胞处理液含有蛋白质变性剂以及任选的渗入性试剂和/或表面活性剂。所述组合物可用于的制备网织红细胞模拟物的方法。

本发明所公开的方法采用无核细胞经试剂处理后模拟网织红细胞，不必使用核酸或类似生物多聚物，步骤简单，成本低廉，可方便地实现血液质控物的工业化生产。

附图说明

图1显示的是通过本发明说明书所公开的方法制备的网织红细胞模拟物，在以核酸荧光染色为检测原理的血液细胞分析仪上测试图片(仅提供网织红细胞，简称RET通道)，图中横轴表示荧光强度，纵轴表示前向散射光强度，黑色散点表示的是网织红细胞模拟物。

图2显示的是实施例1所制备的网织红细胞模拟物，与其他血液细胞模拟物按比例混合配制血液分析仪用的全血质控物，在以核酸荧光染色为检测原理的血液细胞分析仪上测试图片(仅提供RET通道)。图中横轴表示荧光强度，纵轴表示前向散射光强度。

图3显示的是实施例2所制备的网织红细胞模拟物，与其他血液细胞模拟物按比例混合配制血液分析仪用的全血质控物，在以核酸荧光染色为检测原理的血液细胞分析仪上测试图片(仅提供RET通道)。图中横轴表示荧光强度，纵轴表示前向散射光强度。