[发明专利]鹿流行性出血病病毒检测试纸条及制备方法

权利要求书

1、一种鹿流行性出血病病毒检测试纸条，其特征在于，包括底板(7)及依次固定在所述底板上的样品吸收垫(1)、硝酸纤维膜(3)和吸水垫(6)，其中所述样品吸收垫包括胶体金垫(2)，所述胶体金垫为吸附有胶体金标记单克隆抗体的多孔纤维，硝酸纤维膜上设有相互平行的检测线(4)及对照线(5)，所述检测线上包被或喷有鹿流行性出血病病毒多克隆抗体，所述对照线上包被或喷有重组蛋白A。

2、根据权利要求1所述的鹿流行性出血病病毒检测试纸条，其特征在于，所述胶体金垫通过以下方法制备：通过柠檬酸钠还原法烧制直径20nm～50nm胶体金颗粒，将鹿流行性出血病病毒的单克隆抗体溶于胶体金溶液后使用滤膜过滤纯化获得胶体金标记的单克隆抗体溶液，最后将胶体金标记的单克隆抗体溶液吸附多空纤维获得胶体金垫。

3、根据权利要求2所述的鹿流行性出血病病毒检测试纸条，其特征在于，所述鹿流行性出血病病毒的单克隆抗体通过以下方法制备：从经纯化的鹿流行性出血病病毒免疫三次的巴比赛小鼠取脾细胞，使用所述脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合并使用间接酶联接免疫吸附剂测定法检测分泌抗EHDV的特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞，将抗EHDV的特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞注入巴比赛小鼠腹腔制备单抗腹水，最后采集并纯化单抗腹水获得所述鹿流行性出血病病毒的单克隆抗体。

4、根据权利要求1所述的鹿流行性出血病病毒检测试纸条，其特征在于，所述多孔纤维为玻璃纤维。

5、根据权利要求1所述的鹿流行性出血病病毒检测试纸条，其特征在于，所述检测线位于硝酸纤维膜上靠近样品吸收垫的一端，所述对照线位于硝酸纤维膜上靠近吸水垫的一端。

6、根据权利要求1所述的鹿流行性出血病病毒检测试纸条，其特征在于，所述胶体金垫位于样品吸收垫上靠近硝酸纤维膜的一端且部分覆盖所述硝酸纤维膜。

7、一种鹿流行性出血病病毒检测试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

制备鹿流行性出血病病毒单克隆抗体并使用所述鹿流行性出血病病毒单克隆抗体制备胶体金标记单克隆抗体；

制备包括胶体金垫的样品吸收垫，所述胶体金垫为吸附有胶体金标记单克隆抗体的多孔纤维；

在硝酸纤维膜上设定出相互平行的检测线和对照线位置，并用喷膜机分别在所述位置喷上鹿流行性出血病多克隆抗体和重组蛋白A形成检测线和对照线；

将样品吸收垫、包被有检测线和对照线的硝酸纤维膜以及吸水垫固定在底板上获得检测试纸条。

8、根据权利要求7所述的鹿流行性出血病病毒检测试纸条的制备方法，其特征在于，所述胶体金垫通过以下方法制备：通过柠檬酸钠还原法烧制直径20nm～50nm胶体金颗粒，将鹿流行性出血病病毒的单克隆抗体溶于胶体金溶液后使用滤膜过滤纯化获得胶体金标记的单克隆抗体溶液，最后将胶体金标记的单克隆抗体溶液吸附多空纤维获得胶体金垫。

9、根据权利要求7或8所述的鹿流行性出血病病毒检测试纸条的制备方法，其特征在于，所述鹿流行性出血病病毒的单克隆抗体通过以下方法制备：从经纯化的鹿流行性出血病病毒免疫三次的巴比赛小鼠取脾细胞，使用所述脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合并使用间接酶联接免疫吸附剂测定法检测分泌抗EHDV的特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞，将抗EHDV的特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞注入巴比赛小鼠腹腔制备单抗腹水，最后采集并纯化单抗腹水获得所述鹿流行性出血病病毒的单克隆抗体。

10、根据权利要求7所述的鹿流行性出血病病毒检测试纸条的制备方法，其特征在于，所述获得胶体金标记单克隆抗体的步骤包括：

胶体金的烧制和待标记单抗的准备：用柠檬酸钠还原法烧制直径20nm～50nm胶体金颗粒，取-20℃保存的纯化好的鹿流行性出血病病毒的单克隆抗体，将其浓度调整为1mg/mL，4℃保存备用；

胶体金标记抗体最适稳定量的测定：将准备好的待标记单克隆抗体做系列稀释为5μg/mL～90μg/mL，分别取1mL，加入每管1mL分装好金胶溶液中，以测定最适标记量；

抗体的胶体金标记：将2mg鹿流行性出血病病毒的单克隆抗体溶于100mL胶体金溶液，在电磁搅拌器搅拌下，缓慢将单克隆抗体溶液加入胶体金溶液中进行标记；

胶体金标记抗体的纯化：标记好单克隆抗体的胶体金溶液纯化后，于含1％牛血清白蛋白和含0.02％NaN3的0.02mol/L pH8.2Tris-HCl缓冲液中重悬为原体积的1/10，4℃保存备用。