[发明专利]大黄鱼雌核发育的诱导方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种鱼类雌核发育诱导方法，尤其是涉及一种用遗传失活的黄姑鱼(Nibeaalbiflora)精子诱导大黄鱼(Pseudosciaena crocea)雌核发育的方法。

背景技术

在海水鱼类种苗生产中，通过对大黄鱼雌核发育进行人工诱导，其产生后代只有母本基因，可快速纯化种质，加快育种速度，实现单性养殖。公告号为CN1586430的发明专利提供一种石首鱼类精子激发大黄鱼雌核发育二倍体的诱导方法，将精卵混合后，用海水激活，将受精卵用静水压休克实现染色体组加倍。该发明提供了6个实施例，分别采用了浅色黄姑鱼和眼斑拟石首鱼2种石首鱼类精子激活了大黄鱼卵，结合静水压休克得到了大黄鱼雌核发育二倍体。该方法的不足之处在于：培育出来的雌核发育二倍体常常带有父本物种基因。研究发现，按该方法将黄姑鱼精子与大黄鱼卵子混合海水激活后，施以静水压处理，结果全部仔鱼都含有整个的黄姑鱼基因组，为异源三倍体。

许建和等([2]许建和，尤锋，吴雄飞，等.大黄鱼雌核发育二倍体的人工诱导[J].海洋科学，2006，30(12)：37～42)分别于2006年和2007年(5]Xu J H，You F，Yan B L，et al.Effectsof ultra～violet irradiation on sperm motility and diploid gynogenesis induction in large yellowcroaker(Pseudosciaena crocea)undergoing cold shock[J].Aquac Int，2007，15：371～382.)报道了应用同种精子诱导大黄鱼雌核发育的方法：先用紫外线失活大黄鱼精子染色体，再用冷休克的方法诱导雌核发育卵染色体组加倍。应用同种精子诱导雌核发育，常常会混有普通二倍体。即少量精子未被遗传失活，导致卵子正常受精，产生两性融合的普通二倍体。例如，王晓清等([4]王晓清，王志勇，柳小春，等.大黄鱼人工诱导雌核发育后代的微卫星标记分析[J].遗传，2006，28(7)：831～837；[7]王晓清，王志勇，柳小春，等.人工雌核发育大黄鱼(Pseudosciaena crocea)的AFLP分析[J].海洋与湖沼，2007，38(1)：22～28.)发现，在所分析的两个大黄鱼异质雌核发育家系中，有一个家系混有12.5％的普通二倍体。因此，用同种精子诱导大黄鱼雌核发育的不足之处在于：诱导产物必须逐尾进行复杂且工作量巨大的遗传鉴定，鉴别出雌核发育二倍体和混杂在其中的普通二倍体。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可以排除异种基因污染，产物鉴定简便的大黄鱼雌核发育的诱导方法。

本发明包括以下步骤：

1)黄姑鱼精子的遗传失活：取黄姑鱼精液经稀释液稀释后，调整厚度至0.5～1mm，置于紫外灯下照射；

2)卵子雌核发育的启动：取大黄鱼卵子及经步骤1)遗传失活的黄姑鱼精液混合后，加入海水，启动大黄鱼卵的雌核发育；

3)雌核发育单倍体的染色体组加倍。

所述稀释液最好为：NaCl 7.5g、KCl 0.2g、CaCl₂0.2g、NaHCO₃0.2g，加水定容至1L，稀释的倍数最好为20～35倍；紫外线照射的剂量最好为50000～600000μW/cm²。

所述经步骤1)遗传失活的黄姑鱼精液的加入量最好为每克大黄鱼卵加入0.05～0.5ml遗传失活黄姑鱼精液。

所述海水的温度最好为18～28℃。

所述雌核发育单倍体的染色体组加倍可采用以下方法：

用冷休克处理抑制激活卵子的第2次减数分裂；或

用冷休克处理抑制第1次有丝分裂；或

用静水压休克处理抑制激活卵子的第2次减数分裂；或

用静水压休克处理抑制激活卵子的第1次有丝分裂。

所述冷休克处理抑制激活卵子的第2次减数分裂的方法是：卵子启动后0.5～6min，转移到1～5℃海水中，静置5～20min，再转移到室温海水中。

所述冷休克处理抑制第1次有丝分裂的方法是：卵子启动后31～65min，转移到0～5℃下海水中，静置5～20min，再转移到室温海水中。

所述的静水压休克处理抑制激活卵子的第2次减数分裂的方法是：卵子启动后0.5～6min，施予35～45MPa静水压2～5min，再撤去压力，转移到室温海水中。