[发明专利]一种用根霉发酵转化生产α-熊果苷的方法

权利要求书

1、一种用根霉发酵转化生产α-熊果苷的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)制备根霉细胞

将从淀粉厂周边、农田、果园等地方采集的土壤样品筛选所获得的根霉接种于根霉种子液中，于31-34℃、pH 5.0-6.0、180r/m下培养40-46小时，制备得根霉种子液，将制备得的根霉种子液过滤得到根霉细胞，

(2)接种到熊果苷转化液中

将(1)制备得的根霉细胞按4-5％(w/v)的接种量接入熊果苷转化液中，于31-34℃、pH 3.2-4.2、170-200r/m下转化96-120小时，获得含α-熊果苷的转化液，

(3)将所述含α-熊果苷的转化液分离、纯化，得到α-熊果苷纯品。

2、根据权利要求1所述的用根霉发酵转化生产α-熊果苷的方法，其特征在于，所述根霉的种子液和熊果苷转化液的组成为：

(1)所述根霉种子液的组成(w/v)为：2％麸皮，3％木薯粉，

(2)所述熊果苷转化液的组成(w/v)为：60-80mmol/L对苯二酚，180-320mmol/L麦芽糖或180-480mmol/L葡萄糖、甘露糖、半乳糖、木薯粉水解液、玉米粉水解液的一种，50mmol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。

3、根据权利要求1所述的用根霉发酵转化生产α-熊果苷的方法，其特征在于，所述根霉通过以下方法获得：

(1)筛选

从淀粉厂周边、农田、果园等地方采集土壤样品，经稀释后涂布于固体平板培养基上，固体平板培养基的组成(w/v)：2％葡萄糖、5％麸皮浸出液、0.05％MgSO₄、1.2％琼脂，于pH 5.0、32℃下培养，待长出根霉单菌落，取根霉孢子于固体平板培养基上进一步纯化，将纯化的根霉接种于根霉种子液中，于32℃、转速为180r/min的摇床中培养46小时，制备得根霉种子液，将制备得的根霉种子液过滤得到根霉细胞，按5％接种量将根霉细胞接入熊果苷转化液中，转化液的组成：210mmol/L麦芽糖、70mmol/L对苯二酚、50mmol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，于pH 4.0、32℃、180r/m下转化120小时，测定转化液的α-熊果苷含量，选取转化成α-熊果苷含量最高的根霉，

(2)保存

将根霉接种于固体平板培养基上，于pH 5.0，32℃培养96小时后，于4℃冰箱中保存。