[发明专利]山羊支原体肺炎二联灭活疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及山羊支原体肺炎疫苗领域，具体说是一种山羊支原体肺炎二联 灭活疫苗及其制备方法。

背景技术

山羊支原体肺炎是指由支原体引起的发生于山羊的一种接触性呼吸道传染 病，其临诊特征为高热、咳嗽，胸和胸膜发生浆液性和纤维素性炎症，取急性 和慢性经过，发病率在22～30％，有的高达60～80％，死亡率在15～30％。本病 常见于世界各养羊国家和地区，严重影响世界养羊业生产的发展。在我国，本 病流行已久，最早文字记载可追溯到1922年，尤其随着近年来我国养羊业的迅 速发展，该病的流行区域增大，迄今已有甘肃、宁夏、新疆、青海、四川、贵 州、广西、河北、辽宁、江苏、内蒙、江苏、湖南、河南等十余省市报道流行， 病情复杂，危害加重，每年给我国的养羊业生产带来了严重的经济损失。

山羊支原体肺炎的防制面临较大困难，主要原因是其病原学因素复杂。除 了我国流行的优势病原丝状支原体山羊亚种和绵羊肺炎支原体外，目前世界上 已报道的本病病原还包括山羊支原体山羊肺炎亚种、山羊支原体山羊亚种和丝 状支原体丝状亚种大菌落型。这些病原之间无交叉保护，且各国流行的优势病 原不尽相同，加上支原体基因组较小，同一种支原体也易发生变异而导致抗原 差异，因此世界各国一般都根据本地具体流行情况针对性地研制适合于本地区 的灭活疫苗进行免疫预防。

流行于我国的山羊支原体肺炎病原丝状支原体山羊亚种和绵羊肺炎支原体 之间缺乏交叉保护，而所致疾病临床上很难区分，且常会混合感染，因此应用 单一病原制成的疫苗很难适应我国生产实际，而目前我国还没有可以同时预防 这两种病原的二联灭活疫苗。

发明内容

本发明的目的是提供一种可同时预防丝状支原体山羊亚种和绵羊肺炎支原 体这两种病原的二联灭活疫苗及其制备方法，用于山羊支原体肺炎的免疫预防。

本发明的目的是通过下述技术方案来实现的。

一种山羊支原体肺炎二联灭活疫苗，含有丝状支原体山羊亚种(拉丁文学 名：Mycoplasma mycoides subsp.capri strain M87-1)和绵羊肺炎支原体(拉 丁文学名：Mycoplasma ovipneumnoiae strain MoGH3-3)灭活抗原以及ISA206 油佐剂，所述的山羊支原体肺炎二联灭活疫苗按照下述步骤和方法制备：

a制苗用培养基及其制备方法：制苗用培养基为改良KM2培养基；

a.1培养基成分：最低要素培养基MEM占总量的50％，1.7％水解乳蛋 白Hank’s缓冲液占总量的35％，25％酵母浸液占总量的2％，健康马血清 占总量的10％，1％醋酸铊溶液占总量的1％，2万IU青霉素占1％，0.4％酚红 占总量的1％；

a.2培养基制备方法：将1.7％水解乳蛋白Hank’s缓冲液、25％酵母 浸液、1％醋酸铊溶液和0.4％酚红经10磅20分钟高压灭菌，冷却后加入滤 过除菌的最低要素培养基MEM、健康马血清和青霉素，用1mol/L氢氧化 钠溶液调整pH值至7.4～7.8，无菌分装，2～8℃保存备用；

b增殖支原体的程序

b.1支原体的增殖：将丝状支原体山羊亚种和绵羊肺炎支原体分别接种 改良KM2培养基，经3～5天培养，当培养物pH值下降至6.8～7.0时，按 培养基总量的5％进行3～5次连续扩大培养，当培养物pH值下降至6.8～ 7.0时，收获支原体菌液，测定生长滴度并进行超滤浓缩；

b.2支原体的浓缩：用超滤膜系统将支原体菌液进行浓缩，使丝状支 原体山羊亚种和绵羊肺炎支原体菌液浓度均达到6.0～10.0×10⁸ccu/ml；

c.支原体灭活的程序

c.1灭活：给已浓缩的丝状支原体山羊亚种和绵羊肺炎支原体菌液分 别加入浓度40％的甲醛溶液，使菌液中甲醛的浓度达到0.2％，在37℃下各 持续灭活10小时，期间每2～4小时摇振1次，灭活终止，进行灭活检验；

c.2灭活检验：将灭活的支原体菌液进行抽样，各接种改良KM2培养 基2支，进行10倍系列稀释至10^-5，置37℃培养10日，均无支原体生长 者为灭活完全；

d.疫苗配制程序

采用一步乳化法，制成双相油乳剂疫苗；