[发明专利]一种注射用鹿蹄草素含量测定的方法

说明书

技术领域

本发明涉及药物含量测定的方法，特别是涉及注射用鹿蹄草素含量测定的方法。

背景技术

注射用鹿蹄草素(又称鹿衔草素、甲基氢醌)是中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所新兽药工程重点实验室化学合成的抗菌新兽药，药理、毒理实验表明该药具有广谱、高效、无毒、无残留、不易产生耐药性等特点，对大肠杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌等20多种革兰氏阳性和革兰氏阴性菌均具有良好的抑杀作用。注射用鹿蹄草素主要用于治疗奶牛乳腺炎、仔猪水肿病、牛子宫内膜炎、仔猪黄痢和白痢、猪的各种腹泻、雏鸡白痢等。

由于鹿蹄草素是一种氢醌类物质，其溶液易氧化变色、含量极不稳定，严重影响了注射用鹿蹄草素含量RP-HPLC测定的精密性和准确性。研究发现，大部分被测物质贮备液的稳定性除了受自身结构、溶剂影响外，还跟环境有关，因此除了通过改变溶剂提高被测物质储备液的稳定性以外，还可以通过加入适当适量的附加物来改变环境，进而提高贮备液的稳定性。

目前关于被测物质贮备液稳定化的研究在国内外尚无报道，本研究在注射用鹿蹄草素的贮备液中加入了适量的亚硫酸氢钠及依地酸二钠，提高贮备液的稳定性，从而大大增加RP-HPLC测定的精密性和准确性，延长测定时间。

发明内容

本发明的目的是提供一种的注射用鹿蹄草素含量测定的方法。主要通过在注射用鹿蹄草素的贮备液中加入适量的亚硫酸氢钠及依地酸二钠，从而使其极不稳定的贮备液变得稳定，大幅度增加RP-HPLC测定的线性、精密性和准确性，而且使其在测定时间方面的限制较小。

本发明所提供的注射用鹿蹄草素含量测定的具体方法，包括以下步骤：

(1)、配制流动相，设置色谱条件

按甲醇∶水＝15-35∶90配制流动相，设置色谱条件为检测波长：260-360nm，流速为0.8ml/min，进样量为20μl；

(2)、贮备液的制备

①准确称取鹿蹄草素标准品10-34mg、附加物3.5-18mg，在100ml容量瓶中用流动相定容至刻度，即成标准品贮备液，备用；

②取批号不同的的注射用鹿蹄草素，配制方法同(1)，制成供试品贮备液，备用；

③准确称取对苯二酚70-120mg，在100ml容量瓶中加流动相溶解、定容至刻度，即成内标物贮备液，备用；

(3)、专属性考察

在步骤(1)所述的色谱条件下，对附加物、对苯二酚、鹿蹄草素及三者混合物进行RP-HPLC分离检测；

(4)、线性关系考察

分别精密量取鹿蹄草素标准品贮备液和内标物贮备液，混合后用流动相溶解至刻度，过滤、进样、检测，以鹿蹄草素和对苯二酚的峰面积比(Y)与鹿蹄草素的质量浓度(X)进行线性回归；

(5)、精密度试验

取同一批号的鹿蹄草素供试品贮备液，加内标物贮备液后，过滤进样，按内标法以峰面积测定鹿蹄草素的含量；

(6)、稳定性试验

取另一批号的注射用鹿蹄草素样品溶液于室温避光放置0-72h后，分别进样测定；

(7)、样品含量测定

将步骤(2)中所述的鹿蹄草素供试品贮备液，加内标物贮备液后，按内标法以峰面积计算样品中鹿蹄草素的含量。

所述的标准品贮备液或供试品贮备液配方中的附加物为亚硫酸氢钠和依地酸二钠的混合物，其中亚硫酸氢钠3-14mg，依地酸二钠0.5-4.0mg，样品含量测定结果列于表1。

表1样品含量测定结果(n＝3，％)

本发明具有以下有益效果：贮备液变得稳定，操作简便快速，大幅度增加RP-HPLC测定的线性、精密性和准确性，而且使其在测定时间方面的限制较小。

附图说明

图1注射用鹿蹄草素的RP-HPLC色谱图

图2注射用鹿蹄草素含量测定的标准曲线

图中各序号名称如下：

A-附加物、B-内标物、C-鹿蹄草素、D-附加物、内标物及鹿蹄草素的混合物；

具体实施方式

现通过下列实施例对本发明做进一步说明：

实施例1：

注射用鹿蹄草素含量测定的具体方法，包括以下步骤：

(1)、配制流动相，设置色谱条件

按甲醇∶水＝20∶90配制流动相，实验色谱柱规格为C₁₈(4.6mm×150mm，5μm)，设置流速为0.8ml/min，进样量：20μl，检测波长：302nm；

(2)、贮备液的制备