[发明专利]长期稳定的制剂

说明书

本申请是申请日为2000年2月29日、申请号为00804421.X、发明名称为“长期稳定的制剂”的中国专利申请的分案申请。

发明领域

本发明涉及G-CSF(粒性白细胞集落刺激因子)制剂，尤其涉及活性组分损失少及低甲硫氨酸-氧化的G-CSF含量的特别稳定的G-CSF制剂。

背景技术

G-CSF是一种分子量约为20,000的糖蛋白，它作用于嗜中性白细胞的前体细胞以促进它们增殖和分化而成熟。

通过培养患口腔基底癌病人的一种肿瘤细胞系，可提纯出高纯度的人G-CSF。目前，采用基因工程技术已成功地克隆了人G-CSF基因，可从微生物或动物细胞大量生产重组人G-CSF。我们也已将这种提纯的G-CSF转化为制剂产品，并作为抗感染药供应市场(日本专利2116515)。

G-CSF的用量极小，即含有0.1-1000μg(优选5-500μg)G-CSF的制剂通常可供一个成年人每周给药1-7次。但是，这种G-CSF易被安瓿、注射器等的壁吸附。G-CSF不稳定，对环境因素如温度、湿度、氧、UV射线等非常敏感，并可发生物理或化学变化包括缔合、聚合或氧化，这将导致活性大大丧失。

因此，设计了多种配方以向市场提供稳定的G-CSF制剂。例如，含有以下至少一种成分的制剂：(a)选自苏氨酸、色氨酸、赖氨酸、羟赖氨酸、组氨酸、精氨酸、半胱氨酸、胱氨酸和甲硫氨酸的至少一种氨基酸；(b)至少一种含硫的还原剂；或(c)至少一种抗氧剂(日本专利2577744)。也有含表面活性剂如聚山梨酯为稳定剂的G-CSF制剂(日本专利申请146826/88)。

也有报道含有麦芽糖、棉子糖、蔗糖、海藻糖或氨基糖的G-CSF冻干制剂，它可以限制G-CSF在容器中的沉积从而抑制其化学变化(日本专利公开504784/96)。

市场上的一些产品，通常含有蛋白质如人血清白蛋白或纯化的明胶作为稳定剂，用来抑制化学或物理变化。然而，添加这种蛋白质稳定剂也带来了一些问题，例如，必需的且非常复杂的除去病毒污染的过程。

然而，在没有这种蛋白质的情况下，又可能产生Met(甲硫氨酸)-氧化的G-CSF，这就带来了变质的问题。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种G-CSF制剂，它可更稳定地长期贮存，并且Met-氧化的G-CSF的含量较低。

经过仔细的针对上述目的的研究，我们完成了本发明G-CSF制剂，通过加入特定氨基酸联用为稳定剂，可使该制剂在长期贮存后仍含高剩余率的G-CSF，并且其中Met-氧化的G-CSF的含量较低。

因此，本发明提供了一种稳定的G-CSF制剂，该制剂在25℃3个月的长期贮存试验后仍剩余90％或更多的G-CSF，或在40℃2个月的长期贮存试验后仍剩余90％或更多的G-CSF，或在50℃1个月的加速试验后仍剩余90％或更多的G-CSF，或在60℃2周的加速试验后仍剩余90％或更多的G-CSF，在50℃1个月或60℃2周的加速试验后Met-氧化的G-CSF为1％或更少。

本发明还提供含有一种或多种选自赖氨酸、组氨酸、精氨酸、天门冬氨酸、谷氨酸、苏氨酸和天冬酰胺的氨基酸；一种或多种选自疏水性氨基酸的氨基酸；和甲硫氨酸的所述G-CSF制剂。

本发明提供所述G-CSF制剂，其中的疏水性氨基酸选自苯丙氨酸、色氨酸和亮氨酸。

本发明还提供含有一种或多种选自赖氨酸、组氨酸、精氨酸、天门冬氨酸和谷氨酸的氨基酸；一种或多种选自苯丙氨酸、色氨酸和亮氨酸的氨基酸；和甲硫氨酸的所述G-CSF制剂。

本发明还提供含有苯丙氨酸、精氨酸和甲硫氨酸的所述G-CSF制剂。

本发明还提供基本上不含蛋白质为稳定剂的所述G-CSF制剂。

本发明还提供冻干制剂形式的所述G-CSF制剂。

本发明还提供另外含有甘露醇的所述G-CSF制剂。

本发明还提供另外含有表面活性剂的所述G-CSF制剂。

本发明还提供其中表面活性剂为聚氧乙烯脱水山梨糖醇烷基酯的所述G-CSF制剂。

本发明还提供其中表面活性剂为吐温20和/或80的G-CSF制剂。

本发明还提供pH值为5-7的所述G-CSF制剂。

本发明还提供pH值为5.5-6.8的所述G-CSF制剂。

本发明还提供pH值为6.5的所述G-CSF制剂。

本发明还提供G-CSF产自CHO细胞的所述G-CSF制剂。