[发明专利]一种用于降解β淀粉样蛋白的细胞培养提取物及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种用于降解β淀粉样蛋白的细胞培养提取物的制备方法， 该方法包括如下步骤：

1)将哺乳动物的非阿尔茨海默氏病病变区的神经细胞以1×10⁵细胞/cm²至1×10⁸细胞/cm²的密度接种至第一培养基，培养18-30小 时；

2)将第一培养基全量换成新鲜的第二培养基；

3)培养7-21天，培养期间进行每周两次半量培养基的更换， 每次将其中一半的培养基换成新鲜的第二培养基；

4)在最后一次培养基的半量更换后经过至少一天，将第二培养 基全部更换成新鲜的第二培养基并继续培养24至48小时；

5)在0-4℃下以1000至5000rpm转速离心1-30分钟，收集上 清液；

其中，所述非阿尔茨海默氏病病变区选自脑干、脑桥、基底节、 皮质下白质、小脑、脊髓和延髓中的一种或多种，所述第一培养基 和第二培养基不同，并且均为选自Neurobasal Medium、199细胞培 养基、BME细胞培养基、MEM细胞培养基、DMEM细胞培养基、 IMEM细胞培养基、RPMI-1640细胞培养基、Fischer’s细胞培养基、 Ham F10细胞培养基、Ham F12细胞培养基、DMEM/F12细胞培养 基、以及McCoy5A培养基中的一种。

2.根据权利要求1所述的方法，其中将步骤5)中的上清液在 0-25℃下进行浓缩，浓缩倍数为1-300倍。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述浓缩倍数为30倍。

4.根据权利要求1所述的方法，其中将步骤5)中的上清液制 成冻干粉。

5.根据权利要求1所述的方法，其中将步骤5)中的所述上清 液在低于-80℃下冻存。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述哺乳动物选自小鼠、 大鼠、家兔、牛中的一种。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述小鼠为小鼠的胎鼠或 新生鼠，所述大鼠为大鼠的胎鼠或新生鼠。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述小鼠的胎鼠为C57小 鼠的胎鼠，所述大鼠的胎鼠为SD大鼠的胎鼠。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述C57小鼠的胎鼠为孕 龄18天的C57小鼠的胎鼠，所述SD大鼠的胎鼠为孕龄18天的SD 大鼠的胎鼠。

10.根据权利要求1-9任一项所述的方法制备的细胞培养提取 物。

11.根据权利要求10所述的细胞培养提取物作为制备治疗阿尔 茨海默氏病药物的应用。