[发明专利]一种用于降解β淀粉样蛋白的细胞培养提取物及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于生物药物领域，特别是涉及治疗阿尔茨海默氏病的 药物的领域。具体地，本发明涉及一种用于降解β淀粉样蛋白的细 胞培养提取物及其制备方法、以及所述细胞培养提取物作为制备治 疗阿尔茨海默氏病药物的应用。

背景技术

阿尔茨海默氏病是一个发病机制复杂且目前仍无法治愈的神经 退行性疾病。在众多关于发病机制的假说中，淀粉样蛋白假说目前 是最为公认的。根据这个假说，最有潜在价值的治疗方法是通过对 抗淀粉样蛋白疗法来预防和治疗阿尔茨海默氏病的发病过程。事实 上，已经有一些对抗淀粉样蛋白的药物被提议甚至用于了临床治疗 中，如生成淀粉样蛋白过程中的关键蛋白——分泌酶的抑制剂。

阿尔茨海默氏病以淀粉样蛋白在特定脑区的选择性沉积和神经 毒性为主要特征，其中受主要损害的脑区有海马和基底前脑。然而， 尽管淀粉样蛋白存在于整个脑部，而有些脑区却没有明显的淀粉样 蛋白沉积以及后者所引起的神经毒性。在脑组织中，神经元所处的 液态环境存在很多神经细胞的代谢产物，它们对于神经元的正常生 理功能有着至关重要的作用。

发明内容

本发明的一个目的是提供所述细胞培养提取物的制备方法。

本发明的另一个目的是提供一种用于降解β淀粉样蛋白的细胞 培养提取物。

本发明的还一个目的是提供所述细胞培养提取物作为制备治疗 阿尔茨海默氏病药物的应用。

为实现上述目的，本发明的一个技术方案是提供一种用于降解β 淀粉样蛋白的细胞培养提取物的制备方法，该方法包括如下步骤：

1)将哺乳动物的非阿尔茨海默氏病病变区的神经细胞以1×10⁵细胞/cm²至1×10⁸细胞/cm²的密度接种至第一培养基，培养18-30小 时；

2)将第一培养基全量换成新鲜的第二培养基；

3)培养7-21天，培养期间进行每周两次半量培养基的更换， 每次将其中一半的培养基换成新鲜的第二培养基；

4)在最后一次培养基的半量更换后经过至少一天，将第二培养 基全部更换成新鲜的第二培养基并继续培养24至48小时；

5)在0-4℃下以1000至5000rpm转速离心1-30分钟，收集上 清液；

其中，所述非阿尔茨海默氏病病变区选自脑干、脑桥、基底节、 皮质下白质、小脑、脊髓和延髓中的一种或多种，所述第一培养基 和第二培养基不同，并且均为选自Neurobasal Medium、199细胞培 养基、BME细胞培养基、MEM细胞培养基、DMEM细胞培养基、 IMEM细胞培养基、RPMI-1640细胞培养基、Fischer’s细胞培养基、 HamF10、F12细胞培养基、DMEM/F12细胞培养基、以及McCoy5A 培养基中的一种。

优选地，所述非阿尔茨海默氏病病变区选自基底节、小脑、脊 髓和延髓中的一种或多种，更优选地选自小脑或脊髓，进一步优选 地，选自小脑。

优选地，所述细胞培养提取物对对可溶Aβ_1-40的清除效率高于 10％并且对不可溶Aβ_1-40的清除效率高于10％。

优选地，所述细胞培养提取物对对可溶Aβ_1-40的清除效率高于 20％并且对不可溶Aβ_1-40的清除效率高于20％。

优选地，所述细胞培养提取物对对可溶Aβ_1-40的清除效率高于 30％并且对不可溶Aβ_1-40的清除效率高于30％。

优选地，所述细胞培养提取物对对可溶Aβ_1-40的清除效率高于 50％并且对不可溶Aβ_1-40的清除效率高于50％。

优选地，所述细胞培养提取物对对可溶Aβ_1-40的清除效率高于 60％并且对不可溶Aβ_1-40的清除效率高于60％。

优选地，所述细胞培养提取物对对可溶Aβ_1-40的清除效率高于 70％并且对不可溶Aβ_1-40的清除效率高于70％。