[发明专利]一种用于基因治疗的新型细胞特异性内含microRNA结合序列的基因HAAVmir

权利要求书

1、一种新型基因片段HAAVmir，其特征是所说基因片段是由重组腺病毒载体辅助质粒非结构基因复制区、结构基因包装蛋白基因和细胞靶向特异性microRNA序列组成，其可作为辅助质粒制备重组病毒载体，并在基因治疗应用中从源头彻底消除病毒载体衣壳蛋白复制与合成以及清除其污染蛋白。

2、权利要求1所述的基因片段AAVmir，其特征是重组病毒载体辅助质粒非结构基因复制区，选自AAV1型，AAV2型，AAV4型，AAV5型，AAV8型，AAV9或其他AAV非结构基因的AAV rep基因。

3、权利要求1所述的基因片段AAVmir，其特征是重组病毒载体辅助质粒病毒结构基因包装蛋白，选自AAV病毒包装蛋白基因，腺病毒蛋白基因，慢病毒蛋白基因或其它病毒蛋白包装基因。

4、权利要求1所述的基因片段AAVmir，其特征是细胞靶向性microRNA序列，选自肝细胞靶向性、肺细胞靶向性、造血细胞靶向性，或其他细胞靶向性的microRNA，如由4个拷贝肝靶向性的hsa-mir-122microRNA(序列为：TGGAGTGTGACAATGGTGTTTG)和4个拷贝造血细胞特异靶向性的has-mir-142-3p microRNA(序列为：TGTAGTGT TTCCTACTTT ATGGA)组成，也适用于构建其他器官细胞靶向性的microRNA。

5、权利要求1所述基因片段AAVmir辅助质粒的重组腺相关病毒载体，是将基因片段AAVmir、病毒复制功能辅助质粒和病毒载体以1：1：1比例共转染到HEK293细胞，转染72小时后收集细胞，细胞裂解液中的重组腺相关病毒载体经由两次氯化铯超速离心获得。

6、权利要求6所述重组腺病毒载体，其中病毒载体可以是AAV病毒载体，腺病毒载体，慢病毒载体，其他病毒载体以及复合型或嵌合性的病毒载体。

7、权利要求6或7所述的重组腺相关病毒载体，其中AAV病毒载体可以是AAV1，AAV2，AAV4，AAV5，其他类型的AAV病毒载体以及复合型或嵌合型的AAV病毒载体。

8、权利要求1所述的基因片段AAVmir，其可直接应用于细胞株。

9、权利要求1或9所述的基因片段AAVmir，其细胞株选自肝细胞株，肺细胞株，肌肉细胞株，神经元细胞株，干细胞株或其他细胞株。

10、权利要求1所述的基因片段AAVmir重组腺病毒载体以及复合型或嵌合型的AAV病毒载体在制备分子药物和基因治疗中的应用。