[发明专利]一种湿毒清片的分析方法

权利要求书

1.一种湿毒清片的分析方法，所述湿毒清片是由生地、丹参、当归、苦参、蝉蜕、 黄芩、白鲜皮、土茯苓、甘草九味原药材制成，其特征在于其采用以下方法分析：

取本品，置显微镜下观察：淀粉粒众多，单粒类圆形、椭圆形、半圆形或类 多角形，直径10～48微米，脐点点状、星状、三叉状、裂缝状；草酸钙针晶成 束或散在，长45～130微米，纤维淡黄色，梭形，壁厚，孔沟细；

取本品，研细，称取1克，加水20毫升，浓氨水1毫升，三氯甲烷20毫升， 回流加热1小时，分取三氯甲烷层，再加三氯甲烷萃取2次，每次10毫升，合 并三氯甲烷液，挥干，残渣加甲醇1毫升使溶解，作为供试品溶液，另取苦参对 照药材0.5克，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10ul 及对照药材溶液5ul，分别点于同一羧甲基纤维素钠硅胶G板上，以苯-丙酮-乙 酸乙酯-浓氨试液四者比例为2∶3∶4∶0.5配制展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀 碘化铋钾试液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的 斑点；

取本品，研细，称取3克，置具塞锥形瓶中，加70％乙醇30毫升，超声处理 30分钟，离心，取上清液，加盐酸5毫升，水30毫升，加热回流1小时，放冷， 用30-60℃的石油醚提取2次，每次60毫升，合并石油醚液，蒸干，残渣加无 水乙醇1毫升使溶解，作为供试品溶液，另取甘草次酸对照品，加无水乙醇制成 每1毫升含1毫克的溶液作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶 液各5ul，分别点于同一羧甲基纤维素钠硅胶G薄层板上，以30-60℃的石油醚- 苯-乙酸乙酯-冰醋酸四者比例为10∶20∶7∶0.5配制展开剂，展开，取出，晾 干，喷以10％磷钼酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

取本品，研细，称取5克，加甲醇30毫升，加热回流1小时，滤过，滤液 蒸干，残渣加水20毫升使溶解，用稀盐酸调节pH1-2，用乙酸乙酯振摇提取2 次，每次15毫升，合并乙酸乙酯液，水浴上蒸干，残渣加乙醇使溶解，作为供 试品溶液，另取黄芩苷对照品，加甲醇制成1毫升含1毫克的溶液，作为对照品 溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10微升，分别点于同一以含4％ 醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮- 甲酸-水四者比例为5∶3∶1∶1配制展开剂，预平衡30分钟，展开，取出，晾 干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点；

取本品，研细，称取3克，加三氯甲烷20毫升，回流提取30分钟，滤过， 滤液蒸干，残渣加甲醇1毫升使溶解，作为供试品溶液，另取梣酮对照品，加甲 醇制成每1毫升含1毫克的溶液，作为对照品溶液，吸取上述两种溶液各10ul， 分别点于同一羧甲基纤维素钠硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯二者比例 为3∶2配制展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸汽中熏至斑点清晰，供试品色 谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

取本品，研细，称取2克，加三氯甲烷30毫升，超声处理20分钟，滤过， 滤液置水浴上蒸干，残渣加60-90℃的石油醚0.5毫升使溶解，作为供试品溶液， 另取土茯苓对照药材2克，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上 述两种溶液各10ul，分别点于羧甲基纤维素钠硅胶G板上，以三氯甲烷-乙酸 乙酯-甲酸三者比例为9∶1∶0.01配制展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯 化铁试液，在105℃加热约5分钟，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位 置上，显相同颜色的斑点；

本品分析方法还包括的定性检测方法为：

供试品溶液的制备取本品，研细，取0.2克，精密称定，置50毫升具塞 锥形瓶中，精密加入甲醇25毫升，密塞，称定重量，超声提取1小时，再称定 重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得，

对照品溶液的制备精密称取在60℃减压干燥4小时的黄芩苷对照品适量， 加甲醇制成每1毫升含60微克的溶液，即得，

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水- 醋酸三者比例为60∶40∶2配制流动相；检测波长为280nm，理论板数按黄芩苷 峰计算应不低于2500；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10微升，注入液相色谱 仪，测定，即得；本品每片含黄芩以黄芩苷计，不少于6.5毫克。