[发明专利]一类新的单萜类化合物及其制备方法

说明书

技术领域：

本发明涉及生物有机化学技术领域，涉及一类新的单萜类化合物及其制备方法。 

背景技术：

近些年来，以天然产物中的活性单体为底物对其进行系统的结构改造和修饰，用以制备活性更好，毒性更低的化合物，是生物有机化学领域的研究热点同时也具有良好的应用前景。发明人多年来从事天然产物的化学与生物学研究，尤其对萜类化合物有着深入的研究。单萜类的含氧化合物多具有较强的生物活性，是医药、化妆品和食品工业的重要原料。 

芍药中单萜及单萜苷类化合物是其活性的主要物质基础，芍药中代表性成分：芍药苷和芍药内酯苷为具有笼状蒎烷结构的单萜苷类化合物。发明人对芍药内酯苷和芍药苷的植物来源进行了深入的研究，发现这两种化合物存在于芍药和牡丹的根、茎、叶中，资源丰富。发明人以白芍为原料，采用溶剂提取、液-液萃取和柱层析等多种分离、纯化手段相结合，对芍药中有药理活性的蒎烷类单萜苷类化合物进一步分离、纯化，获得纯度达90％以上的白芍双苷(芍药内酯苷、芍药苷)组合物(专利号为ZL 02133298.3)，并将其用于新药开发，经过药理、药效学的研究表明，白芍双苷具有良好的升白作用，(专利申请号为200510015840.0)。 

基于白芍双苷的优良药理作用及独特的结构特点，在现有工作的基础上，发明人以富含蒎烷类单萜苷的提取物为原料，对其进行结构改造，期望得到活性更好的化合物。有文献报道：含芍药苷的制剂口服后，在肠道细菌分泌的β葡萄糖苷酶和酯酶的催化下转化成的芍药苷代谢产物，具有强烈抗人类先天性癫痫中枢性惊厥的作用(刘欣、崔翌，糖苷酶与药物研发《天然产物与研发》2005，17(2)：22 3)。从结构上看，芍药苷和芍药内酯苷非常相似：C₁位羟基与葡萄糖基结合成糖苷，C₉位羟甲基与苯甲酸成酯。因而我们认为将芍药内酯苷的苯甲酰基和葡萄糖基分别水解得到的两个新化合物很可能具有良好的生物学活性。初步药理实验证明两个新的化合物具有良好的镇痛作用，同时这两个化合物还可作为先导化合物，对其做进一步的结构修饰，如烷基化、酰基化及酯化，可以得到一类结构类似，但具有多种不同生物学活性的化合物。发明人最初的技术路线是分别利用碱和酸将原料的苯甲酰基和葡萄糖基水解得到相应的化合物，但实际操作发现在强碱、强酸条件下，生成的目标产物不稳定，产生多种副产物，使目标产物收率极低。因此难以通过化学方法获得从理论上看较容易得到的化合物I、II。因而寻求一种新的试验方法来获得稳定且产率高的目标产物是必需的。 

发明内容：

本发明的一个目的在于公开一类新的单萜类化合物；本发明的另一个目的在于公开这类单萜化合物的制备方法。本发明的单萜类化合物其结构 式为： 

化合物I                                         化合物II

化合物I的制备方法： 

1)微生物培养：将产羧酸酯酶的菌体的固体斜面接种于查氏培养基中，置于恒温摇床于28℃、250rpm震荡培养48h。 

2)加入底物：将富含蒎烷类单萜苷的组合物溶于水中，配制成浓溶液。加入已培养了48h的菌体发酵液中，同样条件下继续培养72h。 

3)发酵液的处理：发酵液抽滤后收集滤液，在减压条件下低温浓缩至小体积，用等体积的乙酸乙酯萃取3遍，萃取液合并后减压浓缩，真空干燥得粗粉。 

4)转化产物的分离纯化：将步骤3)得到的粗粉用硅胶柱层析分离，以二氯甲烷：甲醇梯度洗脱，分段收集，通过TLC检测，合并单一点的洗脱液，减压浓缩，得到白色晶体即为化合物I。其纯度经薄层色谱和高效液相色谱(检测器：ELSD)检测达99％以上。 

化合物II的制备方法： 

1)微生物培养：将产葡萄糖苷酶的菌体的固体斜面接种于查氏培养基中，置于恒温摇床于28℃、250rpm震荡培养48h。 

2)加入底物：将化合物I溶于水中，配制成浓溶液。加入已培养了48h的菌体发酵液中，同样条件下继续培养72h。 

3)发酵液的处理：发酵液抽滤后收集滤液，在减压条件下低温浓缩至小体积，用等体积的乙酸乙酯萃取3遍，萃取液合并后减压浓缩，真空干燥得粗粉。