[发明专利]孢子纲物种体外培养的方法及其用途

权利要求书

1.一种抗原生动物疫苗组合物，所述疫苗组合物包括通过下述方法增殖的裂殖子种群，所述方法包括：

(a)提供包含适合孢子纲物种生长的无限增殖比的吞噬哺乳动物宿主细胞的细胞培养体系；

(b)将宿主细胞与感染阶段的专性细胞内孢子纲原生动物相接触，从而导致宿主细胞内能够在无性阶段连续生长的裂殖子种群的生长，其中所述接触是在有效感染宿主细胞的条件下进行；和

(c)以裂殖子种群的无性分裂形式增殖裂殖子种群；

其中所述专性细胞内原生动物是属于选自等孢子球虫属、囊等孢虫属、隐孢子虫属、艾美球虫属及其组合的属的物种；并且其中当所述专性细胞内原生动物是属于艾美球虫属的物种时，该艾美球虫属物种是能够感染鸟类宿主的物种。

2.一种经分离的原生动物裂殖子或者具有卵囊的裂殖子的种群，其中原生动物选自柔嫩艾美球虫、堆型艾美球虫、巨型艾美球虫、毒害艾美球虫、缓艾美球虫、早熟艾美球虫、和布氏艾美球虫、火鸡和缓艾美球虫、腺艾美球虫、火鸡孔雀艾美球虫、分散艾美球虫、火鸡艾美球虫、无害艾美球虫、近圆艾美球虫及其组合，所述原生动物裂殖子或者具有卵囊的裂殖子的种群是通过下述方法增殖的，所述方法包括：

(a)提供包含适合孢子纲物种生长的无限增殖比的吞噬哺乳动物宿主细胞的细胞培养体系；

(b)将宿主细胞与感染阶段的专性细胞内孢子纲原生动物相接触，从而导致宿主细胞内能够在无性阶段连续生长的裂殖子种群的生长，其中所述接触是在有效感染宿主细胞的条件下进行；和

(c)以裂殖子种群的无性分裂形式增殖裂殖子种群；

其中所述专性细胞内原生动物是属于选自等孢子球虫属、囊等孢虫属、隐孢子虫属、艾美球虫属及其组合的属的物种；并且其中当所述专性细胞内原生动物是属于艾美球虫属的物种时，该艾美球虫属物种是能够感染鸟类宿主的物种。

3.活生物体在制备用于在鸟类中引起抗原生动物保护性免疫的疫苗中的应用，其中所述活生物体是通过下述方法增殖的，所述方法包括：

(a)提供包含适合孢子纲物种生长的无限增殖比的吞噬哺乳动物宿主细胞的细胞培养体系；

(b)将宿主细胞与感染阶段的专性细胞内孢子纲原生动物相接触，从而导致宿主细胞内能够在无性阶段连续生长的裂殖子种群的生长，其中所述接触是在有效感染宿主细胞的条件下进行；和

(c)以裂殖子种群的无性分裂形式增殖裂殖子种群；

其中所述专性细胞内原生动物是属于选自等孢子球虫属、囊等孢虫属、隐孢子虫属、艾美球虫属及其组合的属的物种；并且其中当所述专性细胞内原生动物是属于艾美球虫属的物种时，该艾美球虫属物种是能够感染鸟类宿主的物种，

其中所述疫苗包括能有效引起鸟类的保护性免疫的数量的活生物体。

4.权利要求3所述的应用，其中所述鸟类是驯养的鸟类，且该原生动物是球虫属。

5.权利要求3所述的应用，其中该鸟类选自鸭科、鸠鸽科、雉科、Thesienidae、鹦鹉科及其物种。

6.权利要求3所述的应用，其中该鸟类是火鸡或雏鸡。

7.权利要求3所述的应用，其中活生物体的数量包括裂殖子或卵囊或其混合物，其中所述活生物体总的数量范围是10～10⁶。

8.权利要求3所述的应用，其中活生物体的数量包括10²～10⁵个裂殖子或卵囊。

9.权利要求3所述的应用，其中活生物体包括以选自口服给药、扬撒或雾湿羽毛、卵内注射及其联合的给药方式给药的裂殖子、卵囊或其组合。

10.一种细胞培养体系，所述细胞培养体系包括适于孢子纲物种生长的无限增殖比吞噬宿主细胞，并且细胞培养基包括还原剂，该还原剂的量能有效提高无限细胞培养物中无性增殖生命阶段的孢子纲物种的存活，其中所述提高是相对于无还原剂时培养的孢子纲物种的存活而言的。

11.权利要求1所述的疫苗组合物，其中所述疫苗组合物包括药学上可接受的佐剂。

12.权利要求11所述的疫苗组合物，其中所述疫苗组合物还包括混入的食品组合物。