[发明专利]对虾白斑综合征病毒VP292多肽与应用

说明书

技术领域

本发明涉及基因生物工程技术领域。具体地说，本发明涉及对虾白斑综合征病毒VP292的核苷酸序列，还涉及由该核苷酸序列编码的一种多肽。本发明还涉及这些多核苷酸和多肽的应用，以及所述多核苷酸和多肽的生产方法。

背景技术

对虾白斑杆状病毒(WSSV)是近年来危害我国及亚洲太平洋地区人工养殖对虾的主要病毒原之一，它能高致死率地侵染绝大多数种类的对虾，此外还可侵染淡水及海洋生态系统中多种蟹类、龙虾类、端足类、水蝇类等甲壳纲动物，具有较广泛的宿主范围，因此它不仅严重危害对虾养殖，还对海洋生态造成了影响。WSSV是双链DNA病毒，基因组全长305Kb，是迄今为止发现的最大的动物病毒(J Virol.2001，75：11811-11820)。基因组序列遗传及形态学特征都表明WSSV是一种新病毒，它不属于目前已知的任一种病毒家族，因此国际病毒分类委员会将WSSV归属为新的Whispovirus属，Nimaviridae种(www.ncbi.nlm.nih.gov/ICTVdb/Ictv/index.htm)。由于这是一个全新的病毒，而且WSSV基因组较大，所以绝大多数WSSV病毒结构蛋白与其他病毒没有同源性，因此这些蛋白的功能无法通过与其他病毒蛋白的同源性分析进行预测，因而使WSSV功能研究具有极大的难度。已有20余个基因初步确证其功能，尚有许多基因的功能未知。目前还难以对WSSV进行预防和控制，一方面由于WSSV能在自然环境中存活长时间，更重要的是人们对此病毒分子水平的了解还很少。

已有研究表明，虽然对虾等无脊椎动物没有类似于脊椎动物的适应性免疫系统，但最新的研究发现，WSSV的重组蛋白可以诱导对虾产生抗病保护效应。Witteveldt，J等人首先用pET28原核表达载体表达VP28蛋白用于制备亚单位疫苗，试验结果效果很好(Witteveldt，J.，Cifuentes，C.C.，Vlak，J.M.，van Huhen，M.C.W.Protection of Penaeus monodon against white spot syndrome virus by oralvaccination.J Viro1.2004.78(4)：2057-2061)。贾启军(贾启军，孟小林，徐进平等.对虾白斑综合症病毒囊膜蛋白VP19的融合表达及其抗病毒感染作用.2006，21(6)：585-588)等人用WSSV囊膜蛋白VP19免疫螯虾，证实了VP19也可以作为亚单位疫苗应用于预防WSSV。鉴于VP28和VP19都对白斑综合症病毒有很好的防治效果，有些研究人员着手研究是否其他的一些结构蛋白也可以对白斑综合症病毒产生免疫的效果。而结果也证实了当初的设想，已经证实的如VP37，VP187都可以有效地抑制白斑综合症病毒的感染(Qing-hui Liu，Xiu-LiZhang，Cui-Yan Ma，Yan Liang，Jie Huang.VP37 of white spot syndrome virus interactwith shrimp cells.Letters in Applied Microbiology.2009.48：44-50；Deng-Feng Li，Ming-Chang Zhang，Hai-Jie Yang，Yan-Bing Zhu，Xun Xu，β-integrin mediatesWSSV infection.Virology.2007368：122-132)。

由于WSSV具有广泛的宿主范围，在甲壳纲和昆虫纲动物中均有其敏感的宿主，以虾、蟹等十足目类为多。目前，普遍认为WSSV存在水平传播(经口感染或浸泡感染)及垂直传播两种传播途径，可独立在动物中流行，因此难于在短期内彻底消除。而WSSV为暴发性传染病，该病感染率和死亡率都极高，所以研究针对WSSV的全新预防用的安全有效疫苗，实数当务之急。基因工程疫苗技术是一项新兴的具有应用前景的生物技术，对WSSV囊膜蛋白的表征为发展免疫途径预防WSSV感染提供技术方法。

发明内容

本发明中的编码VP292序列是如此获得的。以纯化的WSSV基因组DNA作为模板。根据WSV237序列设计合成SEQ ID No.3和SEQ ID No.4的序列作为引物，经PCR扩增获得了WSV237的部分序列SED ID No.1的序列。然后通过重组表达WSV237基因，纯化WSV237基因的表达产物，动物活体实验分析其在甲壳动物抗WSSV感染抑制的作用。在本发明被公布之前，尚没有任何人公开过本申请中涉及的VP292序列。