[发明专利]一种基因重组人铁蛋白轻链的制备方法无效
| 申请号： | 200910141974.0 | 申请日： | 2009-06-12 |
| 公开（公告）号： | CN101921798A | 公开（公告）日： | 2010-12-22 |
| 发明（设计）人： | 张曼 | 申请（专利权）人： | 张曼 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12P21/02;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京正理专利代理有限公司 11257 | 代理人： | 王德桢 |
| 地址： | 100088 北京市西*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基因 重组 铁蛋白 制备 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种基因重组人铁蛋白轻链的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)采用RT-PCR技术从人血细胞中获得人铁蛋白轻链基因片段；
(2)将步骤(1)中PCR获得的人铁蛋白轻链基因片段亚克隆到pGEM-T载体上，转化感受态Top10细菌，然后接种于含氨苄青霉素的LB培养基，筛选阳性克隆菌株，提取阳性克隆菌株的质粒pGEM-T/ferritin L，并进行测序鉴定；
(3)以步骤(2)中的质粒pGEM-T/FTL为模板，进行PCR扩增，然后对扩增产物进行双酶切，同时将空质粒pET-30a进行双酶切，分别回收并纯化酶切产物，用T4连接酶连接，获得表达载体，转化感受态大肠杆菌，然后接种于含卡那霉素的LB培养基，筛选阳性克隆菌株，提取阳性克隆菌株的表达质粒pET-30a/ferritin L，并进行测序鉴定；
(4)用IPTG诱导蛋白表达，纯化铁蛋白轻链。
2.根据权利要求1所述的基因重组人铁蛋白轻链的制备方法，其特征在于：步骤(3)中所述大肠杆菌为BL21或DE3。
3.根据权利要求1所述的基因重组人铁蛋白轻链的制备方法，其特征在于：步骤(3)中所述双酶切为用NdeI和BamHI进行双酶切。
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