[发明专利]检测艾滋病病毒的荧光微球免疫层析检测卡及其制备方法

权利要求书

1.一种检测艾滋病病毒的荧光微球免疫层析检测卡，其特征在于：包括用于检测HIV抗体的试纸条A和用于检测HIV p24抗原的试纸条B；所述试纸条A和试纸条B均包括在底板上依次搭接地粘贴的滤纸、样本垫、玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述的玻璃纤维膜上喷涂有荧光微球垫，所述的硝酸纤维素膜上固定有检测区和质控区；所述试纸条A的玻璃纤维膜上喷涂的荧光微球垫为荧光微球标记gp41，gp36重组抗原和荧光微球标记的兔多抗，硝酸纤维素膜上检测区喷涂gp41，gp36重组抗原；所述试纸条B的玻璃纤维膜上喷涂的荧光微球垫为荧光微球标记的抗HIV p24抗体和荧光微球标记的兔多抗，硝酸纤维素膜上的检测区喷涂有配对的抗HIV p24抗体；所述试纸条A和试纸条B的质控区都固定有抗兔抗体。

2.根据权利要求1所述的检测艾滋病病毒的荧光微球免疫层析检测卡，其特征在于：所述的荧光微球是采用有机硅掺杂，无机硅包覆相结合的方法制备的双结构二氧化硅复合荧光物质的发光纳米粒子，其直径为30-150nm。

3.根据权利要求2所述的检测艾滋病病毒的荧光微球免疫层析检测卡，其特征在于：所述的荧光微球的制备方法为：将60ml无水乙醇、2～15ml氨水、1～6ml正硅酸乙酯、1～4ml超纯水、0.1～5mg荧光物质混合在一起，恒温水浴反应6～24小时后，加入Na₂SiO₃封闭微球，Na₂SiO₃的终浓度为2％～10％，最后用活性基团修饰微球表面。

4.根据权利要求3所述的检测艾滋病病毒的荧光微球免疫层析检测卡，其特征在于：所述的活性基团为-CHO、-COOH、-OH、-NH₂或-SH；所述的荧光物质为菲咯啉联钌有机染料、异硫氰根荧光素、异硫氰根罗丹明、6-羧基荧光素酰胺酯、1，8-萘二酰亚胺、7-羟基香豆素有机荧光染料或其掺杂物以及量子点。

5.根据权利要求1所述的检测艾滋病病毒的荧光微球免疫层析检测卡的制备方法，其特征在于，免疫层析试纸条制备步骤包括：

(1)荧光微球垫的制备：首先制备荧光微球，用荧光微球来标记gp41，gp36重组抗原或抗HIV p24抗体，并将其喷涂在玻璃纤维膜上；将荧光微球标记在兔多抗上并同时喷涂在玻璃纤维膜上；

(2)检测区和质控区的制备：将gp41，gp36重组抗原或抗HIV p24配对抗体喷涂到硝酸纤维素膜上制成检测区，将抗兔抗体喷涂到硝酸纤维素膜上制成质控区；

(3)组装和剪切：在粘性底板上依次搭接地粘贴滤纸、样本垫、荧光微球垫、硝酸纤维素膜以及吸水纸，并剪切成所需宽度即成为免疫层析试纸条；

按照上述步骤分别制得试纸条A和试纸条B。

6.根据权利要求5所述的定量检测艾滋病病毒的荧光微球免疫层析检测卡的制备方法，其特征在于，所述荧光微球垫的制备方法如下：

取荧光微球在1000×g离心10～15min，收集沉淀，用0.01M pH4.8的硼酸盐缓冲液调节微球浓度为OD₄₅₀＝0.2，然后分别加入20～100mg/ml对乙基-N，N-二甲基丙基碳二亚胺100μl，2～20mg/ml氮羟基琥珀酰亚胺100μl，再加入0.01M pH4.8的硼酸盐缓冲液，振荡混匀，室温孵育10～30min后，1000×g离心5～15min，沉淀用0.01M pH7～8的硼酸盐缓冲液混匀，并调节微球浓度为OD₄₅₀在0.2～1.0，在0.1ml荧光微球中加入1～10μg gp41，gp36重组抗原、兔多抗或抗HIV p24抗体，充分混匀后，室温搅拌反应1～4h，超纯水离心洗涤2～5次，沉淀用0.01M pH7.2磷酸盐缓冲液复溶沉淀至起始体积后，用BIODOT Dispensing System喷涂至玻璃纤维膜上，25℃真空干燥1～2h，放于干燥环境备用。