[发明专利]检测艾滋病病毒的荧光微球免疫层析检测卡及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医学检测领域，具体地说是涉及一种利用荧光微球免疫层析技术定量检测艾滋病病毒的检测卡及其制备方法。

背景技术

艾滋病是获得性免疫缺陷综合症(acquired immunodeficiency syndrome，简称AIDS)的英文音译。它是由人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，简称HIV，俗称艾滋病病毒)引起的一种病死率极高的恶性传染病。HIV属于逆转录病毒，目前已发现HIV-1、HIV-2二型。AIDS主要传播途径为血液传播、异性和同性间的性行为传播和母婴间垂直传播。

自1981年在美国洛杉矶首次发现艾滋病病例后，艾滋病正在全世界迅速流行。至今，全球已有六千多万人感染了HIV，已造成2500万人死亡。我国在1985年发现第一例AIDS患者，历经了传入期、扩散期，在上世纪90年代进入了快速增长期。截止到2007年10月，我国累计报告HIV感染者223501例，其中AIDS患者62838例，已死亡22205例。专家估计，我国现已有约70万HIV感染者，如不及时采取严格的控制措施，到2010年有可能迅速达到1000万例。艾滋病的流行已引起各国政府的重视，但迄今为止，仍无特效的治疗药物及安全有效的抗HIV疫苗，因而早期诊断并及时发现感染病人，控制其进一步传播仍是艾滋病防治的重要手段之一。

近年来，分子生物学技术飞速发展，HIV抗体检测方法也随之不断更新。酶联免疫吸附法(ELISA)和免疫印迹法(Western-Blotting)相结合是HIV抗体检测的“金标准”方法。但这两种方法需要借助昂贵而复杂的仪器设备，成本高，需由专业人员进行操作，操作复杂，耗时长，不利于在基层推广和在现场进行快速筛查。近几年，HIV抗体快速检测方法发展迅速，常用的快速检测方法有免疫斑点、免疫层析以及凝集试验，其中利用胶体金免疫层析技术检测HIV抗体已有很多文献和专利报道，但胶体金法一般情况下对艾滋病病毒只能进行定性分析。目前国内使用的快速检测试剂，其灵敏性和特异性都不是很理想，导致实际样品检测过程中会产生漏检现象。

HIV感染后抗体的出现需要2-8周的时间，这一阶段为不能检出抗体的“窗口期”，是可能发生传播的危险期。而患者血液中只要有HIV病毒，即存在p24抗原，其通常在感染2-3周后可以检出，通过检测HIV p24抗原可以发现早期的HIV感染，缩短了HIV抗体检测的窗口期。HIVp24抗原的变化情况几乎与HIV感染后的临床急性表现同步，在血液中的浓度不断变化着，p24抗原的检测可以作为HIV抗体检测窗口期的辅助诊断。目前，研制出的第四代HIV抗体酶免检测试剂可以同时检测HIV 1/2抗体和HIVp24抗原，使窗口期缩短了一周多，但由于把抗原和抗体同时包被在酶标板上，存在着相互干扰，影响了免疫反应的特异性，另外，该试剂是采用ELISA方法，检测时操作复杂，比较耗时。

AIDS之所以被称为“超级癌症”和“世纪杀手”，主要是因为HIV病毒复制具有失保真性，病毒很容易发生变异而产生耐药性，使原本有效的药物活性变低甚至失去作用。因此如何有效预防与控制AIDS的传播是一项刻不容缓、复杂而长期的艰巨任务。目前，国内外已研制出很多种HIV检测试剂，但能同时兼顾敏感性、特异性和操作简便快速的试剂很少。

发明内容

本发明的一个目的是针对上述现有技术的不足之处，提供一种灵敏度高、操作简便检测快速、价格低廉的检测艾滋病病毒的荧光微球免疫层析检测卡。

本发明的另一个目的是提供上述检测卡的制备方法。

为了实现上述目的，本发明采取的一个技术方案是：

提供一种能同时检测HIV抗体与HIV p24抗原的荧光微球免疫层析检测卡，该检测卡为双卡型，由两张免疫层析试纸条、底卡以及面卡构成，一张试纸条A检测HIV抗体，另一张试纸条B检测HIV p24抗原；免疫层析试纸条是在底板上依次搭接地粘贴滤纸、样本垫、玻璃纤维膜、NC膜和吸水纸而制成的，所述的玻璃纤维膜上喷涂有荧光微球垫，所述的硝酸纤维素膜上固定有检测区和质控区；所述试纸条A的玻璃纤维膜上喷涂的荧光微球垫为荧光微球标记gp41，gp36重组抗原和荧光微球标记的兔多抗，硝酸纤维素膜上检测区喷涂gp41，gp36重组抗原；所述试纸条B的玻璃纤维膜上喷涂的荧光微球垫为荧光微球标记的抗HIV p24抗体和荧光微球标记的兔多抗，硝酸纤维素膜上的检测区喷涂有配对的抗HIV p24抗体；所述试纸条A和试纸条B的质控区都固定有抗兔抗体。