[发明专利]一种他克莫司粗品的精制方法

说明书

技术领域

本发明属于医药生物技术领域，具体涉及一种大环内酯类强效免疫抑制剂他克莫司的 精制方法，特别涉及通过反相高效液相制备色谱精制他克莫司的方法。

背景技术

近十多年来，我国器官移植发展迅速，已跃居亚洲首位，世界第二。用于器官移植后 减少排异反应的免疫抑制剂类药物也呈现快速增长的趋势，普遍用于预防、抑制排斥的免 疫抑制剂是环孢菌素，但是其副作用大，给广大患者带来了一定的痛苦。

他克莫司(Tacrolimus)又名FK-506，是由日本藤泽制药公司于1984年是从土壤放 线菌中提取的一种大环内酯类抗生素，具有较强的免疫抑制特性，预防各种器官移植所出 现的排斥反应的效果明显优于环孢菌素。他克莫司能减少肝肾移植受体的急、慢性排斥反 应。他克莫司的患者，细菌和病毒感染率也较环孢菌素治疗者低，尤其是该药品有较强的 亲肝性，对肝移植的功效比环孢菌素高100倍，因而大大降低了临床使用剂量，可降低原 治疗费用1/3～1/2。他克莫司和环孢菌素合用具有明显的协同作用，效果更好。他克莫司 不仅可用于防止免疫反应的发生，还可用于治疗已发生的免疫反应及自身免疫性疾病，如 特应性皮炎、风湿、类风湿性关节炎等，因此对防止器官移植的免疫反应和自身免疫性疾 病的治疗具有重要意义。

由于他克莫司结构复杂，手性基团比较多，而且其发酵液中有很多异构体和类似物， 如二氢他克莫司、子囊霉素等，这些物质的存在使得他克莫司采用常规的分离纯化方法无 法完全分离而达到相应的纯度。关于他克莫司分离纯化的文献，主要是美国专利 U.S.4,894366，U.S.6,576,135，U.S.6,881,341，U.S.7,220,357，WO2005/010015， W0/2006/031664。这些专利报道了用吸附树脂或改性硅胶来精制他克莫司，纯化收率低， 导致工业化生产以后产品的成本很高，给患者造成沉重的负担。

发明内容

本发明的目的在于提出一种他克莫司的精制方法，克服了他克莫司现有的提取技术的 不足，提高了他克莫司的收率，降低了成本，从而提供一种稳定性好，分离效果显著，上 样量较大，能够实现工业化的纯化方法。

为了达到上述精细分离，保证一次分离纯度在98.5％以上并保证收率，本发明采用制 备色谱法纯化法。本发明在筛选多种色谱材料和优化色谱条件的基础上，确定了制备色谱 柱及色谱条件，并通过优化工艺路线，得到了如下一种他克莫司粗品的精制方法：

1)室温条件下，用有机溶剂与水的混和溶液溶解他克莫司粗品；

2)采用反相液相制备色谱进行分离纯化；

3)合并收集液，减压浓缩，有机溶剂萃取，浓缩萃取液，重结晶，即得产品。

优选地，步骤1)所述有机溶剂为乙腈-水、乙腈-四氢呋喃-水、甲醇-乙腈-水或异丙 醇-水；进一步优选地，步骤1)所述有机溶剂水溶液的浓度为60-85％；进一步优选地，步 骤1)所述有机溶剂水溶液的浓度为80-85％。

为了得到更好的分离效果，在反相液相制备色谱分离前可以对他克莫司粗品溶液进行 微滤膜过滤，微滤膜的孔径为0.45μm。

优选地，上述步骤2)的色谱条件为：

制备色谱柱：C₁₈反相色谱柱，内径10-50mm，长度250-300mm；

流动相：选自以下中的任意一种：乙腈-水、乙腈-四氢呋喃-水、甲醇-乙腈-水或异丙 醇-水；

洗脱方式：梯度洗脱；

流速20-50mL/min；

柱温20-40℃；

最佳的检测波长为230nm。

如果制备色谱的流动相选择乙睛-水，则洗脱时用乙睛-水(75∶25)洗脱2-3个柱体积， 再用乙睛-水(60∶40)洗脱2-3个柱体积，再用乙睛-水(55∶45)洗脱3-5个柱体积，最 后用乙睛-水(45∶55)洗脱5-6个柱体积；

如果制备色谱的流动相选择乙腈-四氢呋喃-水，则洗脱时用乙腈-四氢呋喃-水(40∶ 40∶20)洗脱2-3个柱体积，再用乙腈-四氢呋喃-水(30∶35∶35)洗脱2-3个柱体积，再 用乙腈-四氢呋喃-水(25∶30∶45)洗脱2-3个柱体积，最后用乙腈-四氢呋喃-水(25∶25∶ 50)洗脱5-6个柱体积；